[发明专利]粪便取样提取黔金丝猴基因组DNA的方法

摘要

粪便取样提取黔金丝猴基因组DNA的方法，取冻存黔金丝猴粪便于灭菌烧杯中，加TE溶解，搅拌静置；取清液于Eppendorf管中，做10管，离心；取清液置Eppendorf管，离心，获肠壁脱落细胞；加预冷的丙酮，洗沉淀，离心，倾去丙酮，重复洗3次，晾干；加入TE和溶菌酶置于37℃条件下保温；离心，弃上清液；于沉淀中加入裂解液和的蛋白酶K置于55℃温浴3h以上；加RNAse放置于37℃条件下保温；将Eppendorf管于94℃沸水浴中放置；离心，取清液，加入两倍体积无水乙醇混匀置-20℃ 30 min以上；离心，用预冷70%乙醇洗涤沉淀两次，离心，待沉淀干燥后加入TE溶解DNA，-20℃保存。

主权项

一种粪便取样提取黔金丝猴基因组DNA的方法，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一：取2.5 g －20℃冻存黔金丝猴粪便于灭菌烧杯中，加30mlTE溶解，搅拌充分后静置2 min；步骤二：取上清液1 mL于1.5 mL Eppendorf管中，做10管，4℃，500 r/min，离心5 min；步骤三：取上清液于另一Eppendorf管，4℃，1 500 r/min离心5 min，获得肠壁脱落细胞；步骤四：加入‑20℃预冷的丙酮0.5 mL，洗沉淀，4℃，1 500 r/min，离心5 min，倾去丙酮，重复洗3次，晾干；步骤五：加入600 µL TE和40 µL的浓度为50 mg/mL溶菌酶置于37℃条件下保温30 min；4℃，1 500 r/min，离心5 min，弃上清液；步骤六：于沉淀中加入500 µL裂解液和12.5 µL的浓度为20 mg/mL蛋白酶K置于55℃温浴3h以上；加1.25 µL的浓度为10 mg/mL RNAse放置于37℃条件下保温30 min；所述裂解液由200 mmol/L NaCl、100 mmol/L Tris‑HCl pH8.0、50 mmol/L EDTA和重量体积比为2.0%十二烷基硫酸钠SDS及体积比为1.0% Triton X‑100配制而成；步骤七：将Eppendorf管于94℃沸水浴中放置10min；步骤八：13 200rpm离心5min，取上清液450ul，加入两倍体积无水乙醇混匀置‑20℃ 30 min以上；步骤九：4℃，13 200 r/min，离心15 min，用0.5 mL预冷70%乙醇洗涤沉淀两次，4℃，13 200 r/min，离心5 min，倾去上清；步骤十：待沉淀干燥后加入50 µL TE溶解DNA，‑20℃保存；所述TE由10 mmol/L Tris‑HCl，1 mmol/L EDTA，pH8.0配制而成。