[发明专利]一种分离纯化能降解大豆蛋白过敏原的蛋白酶的方法在审
| 申请号： | 201410779545.7 | 申请日： | 2014-12-16 |
| 公开（公告）号： | CN104531644A | 公开（公告）日： | 2015-04-22 |
| 发明（设计）人： | 张娟;陈坚;付欧 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/54 | 分类号： | C12N9/54;A23J3/34;A23J3/16 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种分离纯化能降解大豆蛋白过敏原的蛋白酶的方法，属于蛋白纯化技术领域。本发明依次采用了硫酸铵分布沉淀、透析、阴离子交换层析(Q FF)和凝胶过滤层析(Superdex 75)对来源于野生菌株Bacillus sp.BBE201108的具有降解大豆蛋白过敏原作用的蛋白酶进行分离纯化。该蛋白酶被成功分离纯化得到，为该酶的酶学性质、氨基酸序列分析以及实现异源表达研究奠定了基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 分离 纯化 降解 大豆蛋白 过敏原 蛋白酶 方法 | ||
【主权项】：
一种分离纯化能够降解大豆蛋白过敏原的蛋白酶的方法，其特征在于，是从一株可降解大豆主要过敏原的芽孢杆菌发酵上清液中，依次利用硫酸铵分级沉淀、阴离子交换层析柱和凝胶过滤层析柱，来纯化得到蛋白酶；所述方法，具体包括：(1)硫酸铵分级沉淀：在发酵上清液中缓慢添加硫酸铵粉末至饱和度为35‑80％，离心去上清；然后再缓慢加入硫酸铵粉末至饱和度为50‑85％，离心取沉淀，将沉淀的蛋白复溶；(2)透析：将上述复溶后的蛋白进行透析；(3)阴离子交换层析：将透析后的蛋白进行阴离子交换层析，初始上样缓冲液为10‑100mM的缓冲液，pH 8.0‑10.0，洗脱液为上样缓冲液中加入0.1‑1.0mol/L NaCl，线性洗脱；(4)凝胶过滤层析：利用凝胶过滤层析柱进行进一步的分离，得到了电泳纯的蛋白。
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