[发明专利]一种DC细胞与CIK细胞的共培养方法

摘要

一种DC细胞与CIK细胞的共培养方法，属于细胞培养技术领域。包括步骤：1）提取单个核细胞、2）CIK细胞培养、3）DC细胞培养、4）DC细胞和CIK细胞混合培养、5）扩增培养。本发明是一种DC细胞与CIK细胞的共培养方法，在DC细胞刺激成熟，并与CIK细胞共培养之后，按浓度来添加因子GM-CSF，并在培养12小时后，补加因子GM-CSF，从而保持DC细胞活性，延长DC细胞在CIK培养体系中的生存期，长时间保持DC细胞的活性。

主权项

DC细胞与CIK细胞的共培养方法，其特征在于，由如下步骤组成： 1）提取单个核细胞、2）CIK细胞培养、3）DC细胞培养、4）DC细胞和CIK细胞混合培养、5）扩增培养；其中，步骤4）DC细胞和CIK细胞混合培养具体操作如下：4.1）将培养瓶中的DC培养基混匀后，转移至无菌离心管；然后向培养瓶中加入10ml经4 ℃预冷的生理盐水，晃动培养瓶，并用10ml 移液管吹打瓶底的细胞，完毕后将培养瓶内液体移至无菌离心管，最终在离心管中得到用生理盐水悬浮的DC细胞，即DC细胞悬液；4.2）将收集好的DC细胞悬液在离心机内，室温条件下离心10~20分钟；离心，弃上清液，继续用生理盐水重悬细胞，获得一次重悬细胞液，并对一次重悬细胞液进行取样计数；4.3）从层流室的4℃冰箱中取出培养基，静置待培养基恢复至37℃；将步骤4.2）重悬细胞液进行离心，离心后弃上清液，用10ml  培养基重悬细胞，获得二次重悬细胞液，并对二次重悬细胞液进行取样计数；4.4）吸取1.0×106个DC细胞、1.0×108个CIK细胞，在添加有培养基的培养体系中混合培养，培养体系为50ml ；按照50 ~100ng/ml的浓度向培养体系中补加2500 ng~5000ng的因子GM‑CSF，然后置于37℃、体积分数5~6% 的CO₂培养箱继续培养；培养12小时后，再次添加2500 ng~5000ng的因子GM‑CSF，置于37℃、体积分数5~6% 的CO₂培养箱继续培养。