[发明专利]黄曲霉毒素B1免疫亲和柱的制备方法及其应用

摘要

本发明涉及一种黄曲霉毒素B₁(以下简称AFB₁)免疫亲和柱的制备方法及其应用其采用重组蛋白A琼脂糖凝胶作为固相载体，载体上的重组蛋白A与AFB₁抗体IgG的Fc段定向结合，再通过双功能结合剂二甲基庚二亚胺二盐酸盐(DMP)将其交联，形成亲和介质。该亲和柱制备方法简单，成本低、可用作一次性使用。由于使用重组蛋白A，经改造后含有一个C末端半胱氨酸，可单一位点偶联于琼脂糖上，降低了空间位阻，增加了重组蛋白A与AFB1抗体IgG的结合能力，从而使抗体的Fab端朝向外侧，抗原结合区域不受空间位阻干扰。因此，柱子的负载量更大，产品更加稳定，通过定向偶联单抗有效利用率提高近一倍，且在柱容量不变的情况下IAC柱体积缩减一半，使得制备总成本节约近30％。

主权项

黄曲霉毒素B₁免疫亲和柱的制备方法，其特征在于，该方法步骤如下:(1)固相载体的准备：将保存的重组蛋白A琼脂糖凝胶抽干后，用PBS缓冲液洗涤后，用PBS缓冲液悬浮；(2)抗体与固相载体的偶联：a、将AFB₁单克隆抗体与步骤(1)中得到的固相载体重组蛋白A琼脂糖凝胶室温下在垂直混匀器上混合1～3h；b、反应结束后，用步骤a溶液总体积3～4倍的PBS缓冲液洗涤并抽干，得反应物；c、然后在步骤b所得反应物中加入0.2mol/L的三乙醇胺‑硼酸溶液和二甲基庚二亚胺二盐酸盐DMP固体粉末，室温下，在垂直混匀器上混匀1～3h；d、用10～30mL的0.2mol/L的三乙醇胺‑硼酸溶液洗涤一次，并用20～40mL、50mmol/L的乙醇胺‑硼酸溶液重新悬浮，室温下，在垂直混匀器上混匀4～6min；e、用20～40mL的PBS缓冲液洗涤后，抽干，加入5～10mL 50mmol/L，pH3.0的甘氨酸‑HCL溶液，室温下，在垂直混匀器上混匀4～6min；f、反应结束后，用10～30mL的质量浓度为20％乙醇‑水洗涤两次，最后用等体积的20％乙醇‑水重新悬浮，得到混悬液；(3)装柱：取步骤(2)制备的混悬液进行装柱，沉降，安装筛板，用质量浓度为20％的乙醇‑水密封，4℃保存，即得到黄曲霉毒素B₁免疫亲和柱。