[发明专利]小反刍兽疫病毒卵黄抗体的制备方法

摘要

本发明提供一种小反刍兽疫病毒卵黄抗体的制备方法，包括如下步骤：(1)取小反刍兽疫病毒制备小反刍兽疫病毒抗原，将抗原灭活后与弗氏佐剂混合，免疫接种产蛋母鸡，接种后收集鸡蛋4℃保存；(2)采用辛酸法提纯得到小反刍兽疫病毒卵黄抗体。采用本发明方法制备的小反刍兽疫病毒卵黄抗体具有效果明显、特异性高、治疗效果迅速、疗效确实、生产成本低等优点，可有效阻止小反刍兽疫病毒对机体的攻击，具有良好的应用前景。

主权项

1.小反刍兽疫病毒卵黄抗体，其特征在于，所述卵黄抗体的制备方法包括如下步骤：(1)取小反刍兽疫病毒制备小反刍兽疫病毒抗原，将抗原灭活后与弗氏佐剂混合，免疫接种产蛋母鸡，接种后收集鸡蛋4℃保存；(2)采用辛酸法提纯得到小反刍兽疫病毒卵黄抗体，具体如下：①称取0.816g乙酸钠，量取0.54mL冰醋酸和100mL蒸馏水，配制pH值4.5的醋酸盐缓冲液200mL；②取免疫后鸡蛋，分离出蛋黄液，取100mL蛋黄液，按蛋黄液：醋酸盐缓冲液＝1:2的体积比混匀；③加入9mL辛酸，摇匀后室温静置；④3000r/min离心30min，收集上清液，用0.45μm滤膜过滤，收集滤液，冻干即得小反刍兽疫病毒卵黄抗体：步骤(1)中制备小反刍兽疫病毒抗原的方法为：将小反刍兽疫病毒液接种在Vero单层细胞上，置于37℃，CO2培养箱中培养，待75％细胞出现细胞病变时收毒，‑20～20℃反复冻融3次，然后4℃，3000rpm离心30min，除去细胞碎片，收集上清液，密度梯度离心后用作小反刍兽疫病毒抗原；步骤(1)中灭活抗原的方法如下：将小反刍兽疫病毒抗原置于50℃水浴中60分钟；步骤(1)中将灭活后的抗原与弗氏佐剂按1:1的体积比混合后，免疫接种22周龄产蛋母鸡，初次免疫剂量为0.3mg/只，于免疫后14d、22d改为不完全弗氏佐剂进行2次加强免疫，免疫剂量分别为0.6mg/只、1.2mg/只；免疫后每日收集鸡蛋，测定鸡蛋卵黄液中小反刍兽疫病毒特异抗体效价，收集抗体效价为1:128以上的卵黄液，用于制备小反刍兽疫病毒卵黄抗体；所述小反刍兽疫病毒为Nigeria 75/1株。