[发明专利]一种肌钙蛋白I致敏微球的制备方法无效
| 申请号： | 201410448233.8 | 申请日： | 2014-09-04 |
| 公开（公告）号： | CN104198696A | 公开（公告）日： | 2014-12-10 |
| 发明（设计）人： | 谭柏清;王进;甘宜梧;王绮;李静 | 申请（专利权）人： | 山东博科生物产业有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/531 | 分类号： | G01N33/531 |
| 代理公司： | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人： | 张世静 |
| 地址： | 250200 山东省济南*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种肌钙蛋白I致敏微球的制备方法，其包括胶乳微球颗粒与亲和素结合，生物素与抗肌钙蛋白I抗体结合，联接乳胶和抗体等制备工序，本发明制备的肌钙蛋白I致敏微球在使用时可以提高临床检测肌钙蛋白I的灵敏度。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 肌钙蛋白 致敏微球 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种肌钙蛋白I致敏微球的制备方法，其特征在于，包括以下制备步骤：（1）胶乳微球颗粒与亲和素结合：选择粒径为70‑140nm的聚苯乙烯微球，均匀分散到pH为6.0‑7.0的0.05M的MES缓冲液中，使微球浓度为0.5‑5%，加入亲和素，使浓度为1‑10%，在37℃恒温箱中震荡孵育2小时，用真空冷冻离心机离心，15000r/min离心20min，用浓度为0.05M， pH为7.4的PBS缓冲液进行分散，使结合了亲和素的胶乳微球颗粒浓度为5‰；（2）生物素与抗肌钙蛋白I抗体结合：将市购的抗肌钙蛋白I抗体用pH 8.0、浓度为0.1 mol/L 碳酸盐缓冲液稀释到0.1‑1 mg/mL，加入S‑NHS生物素100‑1000μg，37℃恒温箱中震荡孵育2小时，后在4℃透析除去游离的生物素，用浓度为0.05M的pH为7.4的PBS缓冲液进行分散，使结合了生物素的抗肌钙蛋白I抗体浓度为10mg/L；（3）联接乳胶和抗体：将结合了亲和素的胶乳微球颗粒和结合了生物素的抗肌钙蛋白I抗体悬浊液，按照（1‑5）:10的体积比，加入到pH为6.0‑7.0的0.05M的MES缓冲液中，在37℃恒温箱中震荡孵育4小时，用含1g/LBSA浓度为0.05M的pH为7.4的PBS缓冲液进行分散，获得高活性抗肌钙蛋白I抗体致敏微球。
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