[发明专利]一种检测植物中转基因PMI的双抗夹心ELISA方法及试剂盒

摘要

本发明涉及一种检测转基因植物中磷酸甘露糖异构酶(PMI)含量的双抗夹心酶联免疫(ELISA)试剂盒的制备方法及用途。目的是提供一种检测转基因植物(玉米、水稻、棉花等)中是否存在非抗生素筛选标记PMI和对其中PMI含量进行定量的检测方法。该方法中所使用的单克隆抗体在发明专利201410387508.1中有详细描述，对转基因水稻材料的ELISA检测发现，该方法灵敏度高、特异性强、操作简便、定性检测快、定量准，检测PMI最低检测限为1.18ng/mL，线性检测范围在21ng-560ng/mL,可以用于转基因材料的检测。

主权项

一种检测转基因植物中安全生物标签PMI的双抗夹心ELISA方法，其特征在于包括以下步骤：1)植物蛋白提取：称取20‑100mg待检测植物种子、根、茎或叶片，液氮冷却后研磨成粉末，加入1mL的蛋白提取液裂解提取蛋白，冰上放置30min，4度离心15min，取上清，得到待检测蛋白提取物。2)植物中PMI蛋白检测：将抗PMI蛋白的特异性包被抗体60728‑35包被在96孔板上作为捕获抗体；加入待测样本，与单克隆抗体形成复合物；再加入标记的检测抗体60728‑44；最后显色剂显色，根据颜色变化判定样本中是否含有转基因PMI成分，测得的OD值与标准曲线相比，即可计算出天然样本中PMI蛋白含量。