[发明专利]一种异种无细胞真皮基质的制备方法

摘要

本发明涉及一种异种无细胞真皮基质的制备方法，以新鲜盐腌猪皮为原料，采用物理、化学和生化相结合的方法，对猪皮进行脱脂、碱膨胀、消除碱膨胀、角蛋白酶处理、二次酶处理等一系列处理，制备得到一种性能优良、用途广泛的异种(猪)无细胞真皮基质。本方法采用角蛋白酶处理和二次酶处理，该方法具有环境污染少的优点并且通过该方法处理后的异种(猪)无细胞真皮基质具有胶原三维结构完整、透水汽性好、孔隙率高、材料的力学性能优良的优点，可广泛应用于烧伤及整形美容领域。

主权项

一种异种无细胞真皮基质的制备方法，其特征是，（1）称重：准确称重新鲜盐腌猪皮，作为以下各工序的计料依据；（2）浸水： 将称重过的盐腌猪皮，在与材料质量比为3.5~4.0:1、温度18~25℃的NaCl溶液中浸泡60~90分钟，结束后将猪皮取出控水；（3）脱脂： 将处理后的盐腌猪皮浸入与材料质量比为3.0~4.0:1、温度25~45℃的SDS溶液， 浸泡90~120分钟后，再将处理后的材料用与材料质量比为4.0:1的蒸馏水水洗2次，每次15分钟；（4）碱膨胀：将材料放入与材料质量比为3.0~4.0:1、温度18~30℃的NaOH和SDS的混合溶液中，在GSD不锈钢控温比色转鼓中先转动30分钟，再每间隔50分钟转动一次，转动时间为10分钟，总时间为16小时， 处理完毕后放净废液，再将处理后的材料用与材料质量比为4.0:1的蒸馏水水洗2次，每次15分钟；（5）消除碱膨胀：在与材料质量比为2.0~3.0:1、温度25~30℃的SDS的溶液中，逐滴加入质量浓度为3.00%的NH4Cl溶液，调节pH值为8.0~8.5，将上步处理好的的材料放入其中反应60~90分钟，并且每隔30分钟测一次pH值，再将处理后的材料用与材料质量比为3.0:1的蒸馏水水洗2次，每次15分钟；（6）角蛋白酶处理：将材料放入与材料质量比为 2.0:1、温度 40℃、pH 值在 9.5‑10.5之间的角蛋白酶和 SDS 的混合溶液中反应 1 小时，反应完毕后放净废液，再将处理后的材料用与材料质量比为2.0:1的蒸馏水水洗2次，每次15 分钟；（7）二次酶处理：在与材料质量比为2.0:1、温度40℃的胰酶和SDS 的混合溶液中加入 NH4Cl 固体调节 pH值，使其pH值范围在7.7‑8.5之间，将材料放入混合溶液中反应 30 分钟，再在溶液加入 1398酶再反应2小时， 反应完毕后放净废液，再将处理后的材料用与材料质量比为3.0:1的蒸馏水水洗3次，每次15分钟；（8）PBS溶液清洗：在温度 25℃下用与材料质量比为3.0:1 的PBS冲洗3次，每次30分钟；（9）封装：材料装袋封口；（10）消毒：照射消毒，放入‑4℃无菌环境保存。