[发明专利]制备重组牛肠激酶催化亚基蛋白的方法有效
| 申请号： | 201410309168.0 | 申请日： | 2014-07-02 |
| 公开（公告）号： | CN104059896A | 公开（公告）日： | 2014-09-24 |
| 发明（设计）人： | 杨霞 | 申请（专利权）人： | 杨霞 |
| 主分类号： | C12N9/48 | 分类号： | C12N9/48;C12N15/70 |
| 代理公司： | 太原科卫专利事务所(普通合伙) 14100 | 代理人： | 朱源 |
| 地址： | 030001 *** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明涉及基因工程领域重组蛋白的制备方法，具体是一种制备重组牛肠激酶催化亚基蛋白的方法，其步骤为：⑴在牛肠激酶催化亚基的基因EKL上构建突变体EKLM，突变体EKLM的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；⑵替换掉突变体EKLM中存在的大肠杆菌不利表达的密码子从而获得优化的基因序列EKLMO，EKLMO的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。利用本发明所述制备重组牛肠激酶催化亚基蛋白的方法，可以有效保持牛肠激酶催化亚基的活性，具有很高的蛋白得率，而且本发明所述的方法生产工艺简单，产品质量稳定。提纯后的蛋白可以用于生物工程或药物生产等多个目的，具有显著的应用价值。 | ||
| 搜索关键词： | 制备 重组 肠激酶 催化 蛋白 方法 | ||
【主权项】：
制备重组牛肠激酶催化亚基蛋白的方法，其特征在于，其步骤为：⑴在牛肠激酶催化亚基的基因EKL上构建突变体EKLM，突变体EKLM的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；⑵替换掉突变体EKLM中存在的大肠杆菌不利表达的密码子从而获得优化的基因序列EKLMO，EKLMO的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；⑶在EKLMO的5`末端加入牛肠激酶自身的酶切位点序列，在EKLMO的3`末端加入标签序列，得到完整的表达基因片段；⑷将上述表达基因片段克隆进入载体，构建得到高效表达载体，将其转入大肠杆菌BL21，用IPTG诱导重组基因的表达；⑸收集菌体，提纯目的蛋白。
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