[发明专利]一种术后节制肿瘤细胞迁移的DC-CIK治疗方法

摘要

本发明公开了一种术后节制肿瘤细胞迁移的DC-CIK治疗方法，步骤如下：CTC细胞分离及培养；辐照处理CTC细胞，制备靶向悬液；分离PBMC，并诱导DC细胞和CIK细胞，进行CTC悬液靶向抗原递呈；回输治疗：将加有DC和CIK细胞等物质的生理盐水采用静脉滴注的方式回输给患者。本发明设计出了完美的利用医疗中检测和分离循环肿瘤细胞的技术，用于结合现代DC、CIK为基础的过继免疫治疗技术，本发明具有多项优点：1、提前检测循环肿瘤细胞，提前治疗肿瘤的优点；2、只需要几毫升血液即可分离出CTC，靶向抗原获取容易的特点；3、对于肿瘤术后不定期进行针对患者特异性的肿瘤治疗，具有针对性强且准确的特点。

主权项

一种术后节制肿瘤细胞迁移的DC‑CIK治疗方法，其特征在于，步骤如下：(1)CTC细胞分离及培养；(2)辐照处理CTC细胞，制备靶向悬液；(3)分离PBMC，并诱导DC细胞和CIK细胞，进行CTC悬液靶向抗原递呈；(3.1)血液中分离单核细胞(3.1.1)取100ml抗凝处理后的血液，将血液分别加入到4个50ml无菌离心管中；(3.1.2)300g离心10min，离心后，将所有的上层血浆转移到2个新的无菌离心管中，56℃水浴灭活30min，再于400g离心10min后，收集上层黄色液体即低血小板血浆，4℃储存备用；(3.1.3)向该4个下层含血细胞的离心管中加入注射用生理盐水，直到每管30ml混合液，用移液器混匀；(3.1.4)再取4支含15ml淋巴细胞分离液的50ml离心管，缓慢的将血细胞混合液用移液器转移到淋巴细胞分离液的上层；(3.1.5)400g离心20分钟；(3.1.6)离心后将中间白膜层吸入到新的50ml离心管中；(3.1.7)用注射用生理盐水补液到45ml后，300g离心5分钟，清洗单核细胞；(3.1.8)重新加入注射用生理盐水45ml，混匀后离心清洗单核细胞；(3.2)免疫细胞诱导分化及抗原递呈；(3.2.1)第0天，离心收集单核细胞，用20ml无血清培养基重悬，在T75培养瓶中培养2h；(3.2.2)2h后将不贴壁细胞倒入另外一个T175培养瓶中，并用无血清培养液补足T175培养瓶的培养液到50ml，并加入终浓度1000U/ml的白介素2(IL‑2)和终浓度25ng/ml的抗CD3单抗；同时，向T75培养瓶中加入DC培养基和2ml辐照处理的CTC细胞悬液；(3.2.3)第二天，对T175培养瓶进行半量换液；(3.2.4)第四天，对T75培养瓶中的细胞用DC培养基，进行半量换液，并补加2ml处理后的CTC细胞悬液；同时，T175培养瓶中补加培养液到100ml；(3.2.5)第六天，向T75培养瓶中，加入终浓度20ng/ml的TNF‑α。补加培养液到300ml；(3.2.6)第八天，用细胞刮刀刮下T75培养瓶中的DC细胞，加入到CIK细胞中，并补加5ml处理后的CTC细胞悬液，再将培养液补加到500ml，进行混合扩增培养；(3.2.7)第十天，将所有的DC和CIK细胞离心后，用生理盐水洗2次(300g，离心5分钟)，最后，加入到注射用生理盐水中，补加10％人血白蛋白；(4)回输治疗：将加有DC和CIK细胞等物质的生理盐水采用静脉滴注的方式回输给患者。