[发明专利]一种乙酰化转移酶及其抑制剂的特异性检测方法

摘要

本发明提供了一种乙酰化转移酶及其抑制剂的特异性检测方法。将经乙酰化转移酶乙酰化的和其抑制剂抑制的荧光基团标记的底物多肽于肽链端解酶中孵育催化降解，再与碳纳米材料淬灭剂进行吸附，最后使用荧光分光光度计检测。由于乙酰基对肽链端解酶降解的阻碍，导致纳米尺度的淬灭剂分别对乙酰化前后和经抑制剂抑制的荧光标记底物多肽的吸附淬灭作用效果不同，通过其荧光强度的变化对乙酰化转移酶和其抑制剂进行检测。该方法首次提出了乙酰化位点对肽链端解酶活性的抑制作用，并结合碳纳米材料优异的荧光淬灭性质，具有免抗体识别、无污染、高灵敏度和终点检测等特点；同时，检测时间短、样品处理简单，应用前景好。

主权项

一种乙酰化转移酶及其抑制剂的特异性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：a.将有荧光基团标记的乙酰化转移酶底物多肽与乙酰辅酶A在乙酰化转移酶中或在乙酰转移酶和乙酰转移酶抑制剂中孵育催化，使乙酰辅酶A在乙酰化转移酶作用下或在乙酰转移酶和乙酰转移酶抑制剂作用下转移或抑制转移乙酰基修饰到底物多肽的结合位点上；b.将a.步反应得到的反应液于肽链端解酶中孵育消化水解，再与碳纳米材料淬灭剂进行吸附作用；c.最后通过荧光光谱检测，由于乙酰基对肽链端解酶降解的的阻碍，荧光基团标记的修饰有乙酰基的底物多肽与碳纳米材料淬灭剂有效结合，导致荧光淬灭，而经所述的抑制剂作用的荧光基团标记的乙酰基未修饰的底物多肽经肽链端解酶降解作用，荧光仍保持；根据荧光信号的强弱实现对乙酰转移酶或乙酰转移酶抑制剂的检测；所述b.步中碳纳米材料淬灭剂包括氧化石墨烯、多壁碳纳米管或单壁碳纳米管。