[发明专利]一种猪苓硒化多糖的制备方法

摘要

本发明公开一种猪苓硒化多糖的制备方法，属于中医药加工技术领域。该方法将猪苓粗多糖经木瓜蛋白酶水解、过氧化铝纯化柱纯化得到精制猪苓纯多糖，然后利用脱水吡啶为硒化反应的起始物，加入氧氯化硒，以氯化钡为催化剂，硝酸钠溶液为化学稳定剂，得到猪苓硒化多糖。本发明从猪苓粗多糖制备到硒化多糖的制备，操作快捷高效，产品纯度高，硒化剂使用量较少、硒化反应时间较短、硒化多糖得率较高、稳定性高、生物学效价高。

主权项

一种猪苓硒化多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：⑴猪苓粗多糖制备①水提：选无杂质的干净猪苓菌核，经微波干燥，粉碎机粉碎后，过40～60目筛，加入20～40倍量的蒸馏水中，搅拌均匀，超声处理5～10min，功率为600～700W，于pH为中性、温度为90～100℃的条件下，浸提2.5～3.5h，过滤分离，得浸提滤液；②浓缩醇析：将①的浸提滤液投入真空浓缩机中，浓缩为原体积的1/10～1/4，浓缩液中加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度为70％～80％，静置8～12h，离心分离，沉析物干燥，制得猪苓粗多糖，备用；⑵猪苓粗多糖纯化①除杂：将⑴‑②所得猪苓粗多糖加入6～10倍量的蒸馏水中，离心10～20min，除去少量不溶物；收集清液，边搅拌边向其中滴加料液量1.5％～3％的2％鞣酸溶液，煮沸10～15min，除蛋白质；加入料液量1.5％～3％的糖用脱色活性炭，搅匀，脱色10～15min，趁热过滤，得脱色液；②酶解过柱：在45℃～55℃的条件下，向脱色液中加入脱色液量1.5％～3％的木瓜蛋白酶，酶解30～45min，迅速升温至98℃灭酶，保温10～15min，冷却至室温，离心5～10min，除去变性酶，得清液；取清液加入2～4倍量的20％～30％乙醇热溶液中，通过中性氧化铝纯化柱，检测多糖洗脱峰，收集洗脱液，加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度为70％～80％，静置8～12h，离心分离，沉析物蒸发干燥，制得猪苓多糖纯品，备用；⑶猪苓纯多糖硒化①试剂合成：利用亚硒酸和氯化亚砜合成硒含量为2～4％的含硒试剂氧氯化硒；②硒化反应：定量称取⑵‑②的猪苓纯多糖若干克，加入脱水吡啶3.5～5.5ml/g，搅拌均匀，然后滴入氧氯化硒0.8～1.5ml/g，氯化钡0.1～0.3g/g，充分搅拌后加入质量浓度3～4.5％的硝酸钠溶液0.5～0.8ml/g，在常温下，硒化反应8～10h，再加入质量浓度1～1.5％的醋酸3～4.5ml/g，搅拌4.5～5.5h，加入无水乙醇，使混合液中乙醇浓度为70％～80％，静置8～12h，离心分离，得沉析物；③透析干燥:用蒸馏水溶解沉析物后，透析6～8h；至透析液中无钡离子检出，再用无水乙醇醇析透析液，沉淀离心，真空冷冻，用四氯化碳干燥，得粉末状猪苓硒化多糖。