[发明专利]一种等离子纳米金二聚体用于细胞内基因表达调控的方法

摘要

一种等离子纳米金二聚体用于细胞内基因表达调控的方法，属于材料化学技术领域。本发明包括金纳米粒子修饰穿膜肽，金纳米粒子与调控序列的偶联，双功能纳米金二聚体组装，纳米金二聚体对细胞内基因的调控，细胞内基因调控的表征。本发明选择金纳米粒子作为激元，将具有能调控survivin基因的反义核苷酸修饰在单一的金纳米粒子上，再将其与连接有穿膜肽的粒子进行组装，使其能够高效快速的发挥细胞内基因调控的作用。本发明提供了具有细胞内基因调控作用的纳米金二聚体组装方法，得到了结构均一，性能优越的纳米金二聚体结构。

主权项

一种等离子纳米金二聚体用于细胞内基因表达调控的方法，其特征在于步骤如下：（1）金纳米粒子修饰穿膜肽：将柠檬酸还原法合成的金纳米粒子与巯基聚乙二醇PEG 5000、穿膜肽TAT和DNA1混匀，24h后得到表面修饰有穿膜肽的Au‑TAT‑DNA1复合体；（2）金纳米粒子与调控序列的偶联：将金纳米粒子与survivin基因的反义核苷酸anti‑DNA和DNA2偶联，得到表面修饰有调控序列的Au‑anti‑DNA‑DNA2复合体；（3）双功能纳米金二聚体组装：将步骤（1）得到的Au‑TAT‑DNA1复合体和步骤（2）得到的Au‑anti‑DNA‑DNA2复合体混匀，得到双功能纳米金二聚体组装结构；（4）纳米金二聚体对细胞内基因的调控：将步骤（3）中得到的双功能纳米金二聚体组装结构与细胞共同孵育3h后，用胰蛋白酶消化细胞，得到纳米金二聚体调控后的细胞悬液；（5）细胞内基因调控的表征：将步骤（4）获得的细胞悬液中的总RNA提取出来，再将其反转录为cDNA，用荧光定量PCR检测survivin基因在体内的表达量，并与内参基因β‑actin相比较，计算其相对表达量，相对表达量=survivin基因表达量/β‑actin基因表达量。