[发明专利]长链二元酸生产菌株及其制备方法和应用

摘要

本发明涉及一种长链二元酸生产菌株及其制备方法和应用，其解决了现有长链二元酸菌种改造效果不显著的技术问题，其分类命名为假丝酵母菌(Candida sp.)TDTC016，其保藏编号为CGMCC No.8928。本发明可广泛用于长链二元酸的制备领域。

主权项

一种长链二元酸生产菌株在生产长链二元酸中的应用，其特征是将菌种通过常规的斜面培养后，接入50ml一级种子培养16小时，然后将一级种子转接入500ml二级种子培养16小时；种子培养基的配方：酵母膏1～8g/L，玉米浆1～8g/L，蔗糖5～25g/L，KH2PO4 4～12g/L，尿素0.5～4g/L，重蜡40～70g/L，121℃灭菌30分钟；其中，蔗糖和尿素分开单独110℃灭菌20分钟，灭菌后再合并混匀；二级种子发酵完成后，转接入5L发酵罐；发酵罐培养基配方：酵母膏1～8g/L，玉米浆1～8g/L，蔗糖5～30g/L，KH2PO4 4～15g/L，尿素0.5～4g/L，KNO3 5～15g/L，NaCl 0.5～2.5g/L，121℃灭菌30分钟；其中，蔗糖和尿素分开单独灭菌，110℃灭菌20分钟，灭菌后再合并混匀；另外配制75％葡萄糖溶液，105℃灭菌20分钟，发酵初期进行流加；基础培养基为4L；在30℃以1：0.5的通气体积，控制pH5.5～6.5，在第16小时后开始以50ml/h的速度流加月桂酸甲酯，发酵时间为144‑156小时；整个发酵过程用10M NaOH溶液自动流加控制pH，同时通过转速的调整使溶解氧保持在30％；发酵结束后，将发酵液加热至70～80℃；再将pH调至9～9.5，除去菌体沉淀，保留上清；脱色，温度保持在70～90℃，得到滤清液，用酸酸化至pH2.5，70～90℃保温，冷却，离心或压滤，水洗，清洗后的沉淀取出后真空干燥，得到长链二元酸；所述长链二元酸生产菌株，其分类命名为假丝酵母菌(Candida sp.)TDTC016，其保藏编号为：CGMCC No.8928；所述假丝酵母菌基因组里增加了一个拷贝的CYP单加氧酶基因；所述CYP单加氧酶基因碱基序列如序列表的序列7所示。