[发明专利]一种冻干保藏糟醅中群体微生物的处理方法

摘要

本发明涉及一种冻干保藏糟醅中群体微生物的处理方法，主要步骤为：在糟醅中加入细胞培养所用的PBS缓冲液进行多次漩涡震荡、离心分离糟醅及洗脱液，再离心所有洗脱液获得菌泥；然后将收集得到的菌泥进行预冻和真空冷冻干燥。通过对原糟醅和处理后的各样品中微生物损失率及微生物结构进行分析，结果表明：采用本发明的处理方法，细菌与真菌总量的损失率在2.0%以内，单菌株的损失率在2.5%以内，且收集的菌泥具有生物活性，微生物结构与原糟醅一致。运用该预处理方法收集得到的菌泥，便于将其装入安瓿管内冷冻干燥及后期真空融封，延长保藏时间，该方法可广泛应用于其它欲分离、收集群体微生物且保持生物活性的用途，为微生物多样性分析的群体损失率估算提供重要依据。

主权项

一种冻干保藏糟醅中群体微生物的处理方法，步骤如下： 1）洗脱、转移步骤： a、称取糟醅于无菌离心管中，加入无菌玻璃珠及细胞培养用的无菌PBS缓冲液，漩涡震荡4～6min，在离心机内离心5～7min，收集洗脱液，备用； b、将步骤a中洗脱的剩余糟醅加入无菌PBS缓冲液，漩涡震荡3～4min，在离心机内离心5～7min，收集洗脱液，备用； c、上述步骤b重复2次，共计震荡洗脱糟醅4次，总计加入无菌PBS缓冲液150～255ml； d、合并上述a、b、c的洗脱液，在离心机内离心6～8min，收集上清液及菌泥； 2）真空冻干步骤： a、将步骤1）中收集到的菌泥加入混合保护剂，菌泥与混合保护剂的质量体积比为1:1～1:2，混匀，分别置于安瓿管内，在‑80～4℃温度条件下预冻6～8h；。 b、将上述预冻样品在‑50～‑40℃温度条件下真空冷冻干燥19～23h，冻干结束后，检测微生物存活率，即得。