[发明专利]IPV皮内免疫有效性评价用动物模型的建立方法

摘要

本发明提供一种IPV皮内免疫有效性评价用动物模型的建立方法，选择猪龄为3-5个月、体重为10-20kg的属于华南型猪种的云南版纳小耳猪，随机分组，分别进行第一次无针皮内注射IPV疫苗免疫，免疫后30天采血，分离血清，再分别进行第二次无针皮内注射IPV疫苗免疫，免疫后7天和30天采血，分离血清，再分别进行第三次无针皮内注射IPV疫苗免疫，免疫后1个月、6个月、12个月、18个月和24个月采血，分离血清，将各血清于56℃灭活30分钟，用常规稀释后，用Sabin株I型、Ⅱ型和Pfizer株III型病毒中和各血清，病毒用量为30～300TCID50，在35～37℃下中和3小时，加入细胞，于35～36℃培育7天后，根据CPE判定结果，即建立起IPV皮内免疫有效性评价用动物模型。为疫苗的皮内免疫研究提供了一种理性动物模型，可为研究皮内免疫途径减少疫苗抗原用量提供可靠手段。

主权项

一种IPV皮内免疫有效性评价用动物模型的建立方法，其选择猪龄为3‑5个月、体重为10‑20kg的属于华南型猪种的云南版纳小耳猪，其特征在于经过下列步骤：A、将所选小猪随机分成五组，即无针皮内注射的下列三个试验组：1/3剂量组、1/5剂量组、1/10剂量组，以及肌肉注射的全剂量对照组和生理盐水阴性对照组，每组5～10只，免疫前先对每只小猪采血3‑5ml，于37℃下放置2小时，再放入4℃过夜，于次日在无菌条件下吸出血清，冻于‑80℃待用；B、对步骤A的1/3剂量组、1/5剂量组、1/10剂量组的每只小猪，按对应的1/3剂量、1/5剂量、1/10剂量，分别进行第一次无针皮内注射IPV疫苗免疫，同时对全剂量对照组的每只小猪进行肌肉注射0.5ml全剂量的IPV疫苗免疫，对阴性对照组的每只小猪注射0.5ml生理盐水：免疫后30天采血3‑5ml/只，于37℃下放置2小时，再放入4℃过夜，于次日在无菌条件下分别吸取血清，冻于‑80℃待用；C、对步骤B的三组小猪，按对应的1/3剂量、1/5剂量、1/10剂量，分别进行第二次无针皮内注射IPV疫苗免疫，同时对全剂量对照组的每只小猪进行肌肉注射0.5ml全剂量的IPV疫苗免疫，对阴性对照组的每只小猪注射0.5ml生理盐水：免疫后7天和30天，分别采血3‑5ml/只，于37℃下放置2小时，再放入4℃过夜，于次日在无菌条件下分别吸取血清，冻于‑80℃待用；D、对步骤C的三组小猪，按对应的1/3剂量、1/5剂量、1/10剂量，分别进行第三次无针皮内注射IPV疫苗免疫，同时对全剂量对照组的每只小猪进行肌肉注射0.5ml全剂量的IPV疫苗免疫，对阴性对照组的每只小猪注射0.5ml生理盐水：分别于免疫后1个月、6个月、12个月、18个月和24个月，采血3‑5ml/只，于37℃下放置2小时，再放入4℃过夜，于次日在无菌条件下吸出血清，冻于‑80℃待用；E、将步骤B、C、D分离的各血清于56℃灭活30分钟，用Vero细胞或Hep2细胞在微量96孔培养板上检测中和抗体，其中对照组和试验组样品血清分别用MEM培养液按1: 4，1: 8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256，1:512，1:1024，1:4096，1:8192，1:16384稀释后，按常规用Sabin株I型、Ⅱ型和Pfizer株III型病毒中和各血清，Sabin株I型、Ⅱ型和Pfizer株III型病毒用量为30～300 TCID50，中和条件为35～37℃下中和 3小时，加入细胞，于35～36℃培育7天后，根据CPE判定结果，即建立起IPV皮内免疫有效性评价用动物模型。