[发明专利]一种测定蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法

摘要

本发明公开了一种测定蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法，属于分析技术领域。在常规氨基酸分析中，蛋白质或肽分子中的谷氨酰胺被盐酸水解后转化为谷氨酸，分析结果中只能显示谷氨酸的总量，无法显示蛋白质中谷氨酰胺的含量。本方法根据蛋白质或肽分子中结合态谷氨酰胺经特殊试剂双(三氟乙酰氧基)碘苯（BTI）反应后不被盐酸水解的特点，借助BTI试剂保护、再经过酸水解后测定谷氨酸含量，并与未经BTI保护样品中谷氨酸含量的差异，计算蛋白质或肽分子中结合态的谷氨酰胺含量。该方法包括待测样品制备，BTI保护处理、酸解、衍生、氨基酸色谱柱分离、对照样品制备、含量测定。此方法简单，快速，灵敏度高，能及时地指导蛋白质水解工业化生产。

主权项

 一种测定蛋白质或其水解物中结合态谷氨酰胺含量的方法，其特征在于：它通过以下步骤实现：(1)样品的溶解：取蛋白质或其水解物溶于蒸馏水中，45℃～55℃水浴中搅拌使之充分溶胀；(2) 样品的BTI保护处理：取步骤（1）样品液，加双(三氟乙酰氧基)碘苯BTI溶液和吡啶溶液，于50℃～55℃水浴保温，然后，再于60℃～80℃水浴或充氮气蒸干；(3) 对照样品处理：取步骤（1）样品液，加乙腈溶液和吡啶溶液，于50℃～55℃水浴保温，然后，再于60℃～80℃水浴或充氮气蒸干； (4) 酸水解：在含有（2）、（3）样品的消化管中加入酸，封口后完全水解，再定容、过滤；(5)衍生和上柱分析：取步骤（4）水解液，用氨基酸衍生化试剂衍生和上柱；(6)实验结果的处理：分别以样品质量为基数，通过氨基酸色谱分析并计算，BTI保护样品和对照样品中的谷氨酸百分含量之差即为结合态谷氨酰胺含量。