[发明专利]一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法及其应用

摘要

本发明利用三维胶原支架在低血清浓度下完成胶质瘤干细胞的富集培养，为胶质瘤体外试验研究提供了一种新型的，更接近体内真实环境的干细胞培养方法及应用。所述三维培养方法中选用胶原作为制作3D支架的材料，胶原是细胞外基质最主要的成分，可为细胞提供良好的粘附与迁移环境，并具有良好的生物相容性、机械强度、降解系数和低免疫原性。本发明研究多孔胶原支架三维培养对胶质瘤细胞干性的影响，探讨其机制，摸索更接近于体内肿瘤干细胞环境的靶向GSCs药物试验方法，并进行了药敏试验，继而对胶质瘤耐药机制进行进一步的研究，为丌发GSCs靶向药物提供了新的思路奠定基础，其成果具有一定的理论意义和应用价值。

主权项

一种新型胶质瘤干细胞的三维培养方法，其特征在于，利用三维胶原支架，并摸索出适宜的低血清培养浓度，所述培养方法包括以下步骤：1)将三维胶原支架切割成1*5*5mm的立方体，使用前Co60照射消毒过夜，4℃干燥环境储存备用，待接种细胞前，以细胞培养液浸泡预处理12小时；2)将胶质瘤细胞株消化离心至单细胞悬液，再用PBS洗净2遍，以去除血清成份，并进行细胞计数，以每个三维胶原支架1×104～5×104个细胞的密度将胶质瘤细胞接种于步骤1)处理后的三维胶原支架上，静置4小时，待细胞有效粘附于支架上后，置于细胞培养板中培养，每2日更换1次培养液，即得到3D胶质瘤细胞模型；步骤1)中所述的细胞培养液为添加1％胎牛血清的DMEM；所述三维胶原支架的平均孔径为50μm；所述三维胶原支架的材料为I型胶原；胶质瘤细胞株为U87细胞。