[发明专利]一种用于预防病毒性心肌炎的重组病毒及其疫苗和应用

摘要

本发明一种重组病毒，以水疱型口炎病毒为载体，在水疱型口炎病毒的囊膜糖蛋白G和聚合酶蛋白L之间插入编码抗原CVB3结构蛋白VP1基因。本发明还提供了上述重组病毒的制备方法，由pP、pL、pXN2‑VP1、pVSVG和pN五质粒转染BHK21细胞获得。本发明还提供了一种疫苗，含有有效量的上述的重组病毒。本发明的疫苗可以以滴鼻、口服或经生殖道方式实施粘膜部位接种，能解决现有技术中常规疫苗无法有效诱导高强度的粘膜免疫应答，抗原不能在粘膜局部有效停留、不足以被APC提的技术问题。本发明的重组病毒可有效增强CVB3特异性血清和粘膜局部抗体应答，明显加强全身及肠道粘膜局部特异性CD8 T细胞杀伤能力。

主权项

一种重组病毒，其特征在于 ：以水疱型口炎病毒为载体，在所述的水疱型口炎病毒 的囊膜糖蛋白 G 和聚合酶蛋白 L 之间插入编码靶抗原 CVB3 结构蛋白 VP1 基因，所述的编码靶抗原 CVB3 结构蛋白 VP1 基因的序列如 SEQ ID NO ：1 所示；所述重组病毒的制备方法如下：（1）选择靶抗原 CVB3 结构蛋白 VP1 基因，以质粒 pXN2 为载体，在所述的 pXN2 载体中插 入编码靶抗原 CVB3 结构蛋白 VP1 基因，得到质粒 pXN2‑VP1 ；（2） 在培养皿中培养 BHK 细胞，待细胞长满 40~70% 的时候，收集 BHK 细胞 ；（3）用含有 T7 RNA 聚合酶的痘病毒在无血清 DMEM 培养基中与 BHK 细胞共孵育，然后用 脂质体将水疱型口炎病毒的反向遗传重组质粒 pXN2‑VP1、 pP、 pL、 pN、和 pVSVG 的五质粒系 统转染到 BHK 细胞中，36‑60h 后收集细胞上清，过滤膜后高速离心，所述的离心浓缩后的病毒分装溶解在 PBS 中备用，所述 CVB3 结构蛋白VP1来源于 CVB3 Nancy 株。