[发明专利]生产成熟的人促红细胞生成素的方法以及包含获自该方法的人促红细胞生成素的组合物

摘要

本发明涉及在巴斯德毕赤氏酵母中生产缺乏与针对宿主细胞抗原的抗体的可检测交叉结合活性的蛋白质的方法。描述了在巴斯德毕赤氏酵母中生产重组糖蛋白的方法，所述重组糖蛋白缺乏与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性，所述方法包括提供重组巴斯德毕赤氏酵母宿主细胞，其不展现对于N-聚糖或O-聚糖的β-甘露糖基转移酶2活性，不展现对于N-聚糖或O-聚糖的选自β-甘露糖基转移酶1活性和β-甘露糖基转移酶3活性的至少一种活性，并且其包括编码所述重组糖蛋白的核酸分子；在培养基中生长所述宿主细胞；和从所述培养基中回收所述重组糖蛋白。

主权项

一种在巴斯德毕赤氏酵母中生产成熟的人促红细胞生成素的方法，所述成熟的人促红细胞生成素主要包含唾液酸封端的双分枝N‑聚糖，并且没有与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性，所述方法包括：（a） 提供重组巴斯德毕赤氏酵母宿主细胞，其被遗传工程化以生产唾液酸封端的双分枝N‑聚糖，并且不展现对于N‑聚糖或O‑聚糖的β‑甘露糖基转移酶2活性，并且不展现选自对于N‑聚糖或O‑聚糖的β‑甘露糖基转移酶1活性和β‑甘露糖基转移酶3活性的至少一种活性，并且其包括两种或更多种核酸分子，各自编码包含融合到信号肽的成熟的人促红细胞生成素的融合蛋白，所述信号肽靶向ER并且当所述融合蛋白处于ER中时被除去；（b） 在对表达和加工所述第一和第二融合蛋白有效的条件下在培养基中生长所述宿主细胞；以及（c） 从所述培养基回收所述成熟的人促红细胞生成素，来产生所述成熟的人促红细胞生成素，其主要包含唾液酸封端的双分枝N‑聚糖并且没有与针对宿主细胞抗原制得的抗体的可检测的交叉结合活性。