[发明专利]一种玉米珠心原生质体的制备和转化方法有效
| 申请号： | 201410052434.6 | 申请日： | 2014-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN103789252A | 公开（公告）日： | 2014-05-14 |
| 发明（设计）人： | 黄玉碧;张军杰;陈江;刘汉梅;胡育峰;刘应;余国武;顾勇 | 申请（专利权）人： | 四川农业大学 |
| 主分类号： | C12N5/04 | 分类号： | C12N5/04;C12N15/82 |
| 代理公司： | 北京众合诚成知识产权代理有限公司 11246 | 代理人： | 龚燮英 |
| 地址： | 611130 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种玉米珠心原生质体的制备和转化方法，涉及细胞工程领域。本发明是取授粉后6天到8天的玉米珠心组织，高渗处理后酶解，然后再用含0.55M甘露醇的MMG溶液重悬，制得珠心原生质体；最后采用PEG诱导转化。本发明操作简单，制备珠心原生质数量大、活性高，原生质细胞转化效率高，为后续基因功能分析，特别是有关细胞程序化死亡机理解析提供有力的技术支持。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 玉米 原生 质体 制备 转化 方法 | ||
【主权项】：
一种玉米珠心原生质体的制备方法，其特征是，其步骤如下：（1）在授粉后6天到8天，取玉米珠心组织2g，加入20ml浓度为0.6M的甘露醇高渗暗处理10分钟，去除甘露醇后加入20ml酶解液，立即用真空泵在压力0.04x105Pa‑0.05x105Pa之间抽真空30min，然后酶解，酶解条件是28℃恒温摇床，80rpm黑暗情况下摇4‑6小时，在摇的过程中，隔一小时用手来回晃荡两次，使其充分酶解；（2）将（1）中酶解后的珠心混合液加入W5溶液终止酶解反应后，80g水平离心3min，弃去上清，用4mL含0.55M甘露醇的MMG溶液重悬，重悬液转移至5mL的EP管中自然放置30分钟；然后弃去上清，保留下面沉淀，再用2mL含0.55M甘露醇的MMG溶液重悬，制得玉米珠心原生质体。
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