[发明专利]一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用

摘要

本发明公开了一种基于GS筛选系统的动物细胞高效表达载体及应用。本发明提供了一种构建表达载体的方法，包括如下步骤将出发载体pIRSE‑EGFP‑B的驱动目的基因表达的CMV启动子替换为hCMV启动子，且在所述出发载体pIRSE‑EGFP‑B种插入标记基因，得到表达载体。本发明的实验证明，本发明先将pIRSE‑EGFP载体的BamHⅠ位点突变得到载体pIRSE‑EGFP‑B，在其基础上将原有CMV启动子替换为人hCMV启动子，并增加了GS标记基因，得到高效表达载体。该高效表达载体在表达目的蛋白更有优势，通过GS系统能够快速获得高效表达细胞系。

主权项

一种构建表达载体的方法，包括如下步骤：将出发载体pIRES2‑EGFP‑B的驱动目的基因表达的CMV启动子替换为hCMV启动子，且在所述出发载体pIRES2‑EGFP‑B中插入标记基因，得到表达载体；所述标记基因为GS标记基因；所述GS标记基因的核苷酸序列为序列表中的序列3自5’末端第12‑1797位核苷酸；所述hCMV启动子的核苷酸序列为序列表中的序列3自5’末端第1806‑3953位核苷酸；所述出发载体pIRES2‑EGFP‑B按照包括如下步骤的方法制备：将载体pIRES2‑EGFP进行BamHⅠ单酶切后再补平粘性末端得到出发载体pIRES2‑EGFP‑B；所述出发载体pIRES2‑EGFP‑B的核苷酸序列具体为序列表中序列4。