[发明专利]一种MHC限制性杀伤T细胞的体外诱导培养方法

摘要

本发明涉及细胞体外诱导培养及扩增技术领域，特别涉及一种MHC限制性杀伤T细胞的体外诱导培养方法：分离脐带血单个核细胞；脐带血单个核细胞放入培养基中培养，采用含10%FBS的RPMI-1640为基础培养基，添加不同的细胞因子在培养细胞的4个阶段使用。使用脐血中提取的MNC细胞作为原料，通过添加细胞因子，经过15天的扩增培养获得扩增10-15倍的CTL，并且具有旺盛的杀瘤活性，使脐血可以作为肿瘤过继免疫治疗所需T淋巴细胞的来源；该方法能够获得较其他方法数量更多的CTL，并且体外细胞毒性试验与荧光定量PCR实验检测细胞毒性增强。

主权项

一种MHC限制性杀伤T细胞的体外诱导培养方法，其特征是包括以下步骤：（1）分离脐带血单个核细胞；（2）脐带血单个核细胞放入培养基中培养，采用含10% FBS的RPMI‑1640为基础培养基，添加不同的细胞因子在培养细胞的4个阶段使用，第一阶段为第1天，在基础培养基中加入10‑100ng/mL的GM‑CSF, 10‑100ng/mL的γ‑IFN,  10‑100ng/mL的IL‑15, 1‑5ug/mL的PHA‑P和10‑1000IU/mL的IL‑4进行培养；第二阶段为第2天，在基础培养基中加入10‑100ng/mL的SCF,10‑100ng/mL的FLT‑3L,  10‑100ng/mL的anti‑CD3, 10‑100ng/mL的anti‑CD28和100‑1000IU/mL的IL‑2进行培养；第三阶段为第5‑8天，在基础培养基中加入10‑100ng/mL的SCF, 10‑100ng/mL的FLT‑3L, 10‑100ng/mL的IL‑15和100‑1000IU/mL的IL‑2进行培养；第四阶段为第9‑15天，在基础培养基中加入10‑100ng/mL的IL‑15和100‑1000IU/mL的IL‑2进行培养。