[发明专利]大肠杆菌表达的融合蛋白MBP-MART-1及其制备和应用

摘要

本发明公开了一种大肠杆菌表达的融合蛋白MBP-MART-1及其制备和应用，该蛋白是通过以下方法制备得到的：将人MART-1基因的扩增产物连接到pMAL-p5x载体中，得重组载体，将重组载体转化入大肠杆菌中，培养，鉴定，得到含重组载体的阳性大肠杆菌；将该阳性大肠杆菌落接种于培养基中，培养，用IPTG诱导表达后，将菌液离心弃上清，将菌体裂解后，离心取上清，对上清进行纯化，检测，得到该蛋白。该蛋白可用于制备MART-1抗体中。本发明可快速简便地获得大量大肠杆菌表的MART-1可溶性蛋白，解决了其它方法获得大肠杆菌表达的MART-1可溶性蛋白需要大量诱导并要透析的复杂过程。

主权项

一种大肠杆菌表达的融合蛋白MBP‑MART‑1，其特征在于，所述融合蛋白MBP‑MART‑1是通过以下方法制备得到的：通过PCR方法得到人MART‑1基因的扩增产物，将其连接到pMAL‑p5x载体中，得到MART‑1‑pMAL‑p5x重组载体，并将MART‑1‑pMAL‑p5x重组载体转化入大肠杆菌中，经25～37℃培养16～20小时后，经PCR鉴定，得到含MART‑1‑pMAL‑p5x重组载体的阳性大肠杆菌；将该阳性大肠杆菌落接种于LB培养基中，25～37℃培养至OD₆₀₀=0.6～0.8，用异丙基‑β‑D‑硫代吡喃半乳糖苷诱导表达3～4h后，将菌液离心弃上清，将菌体用细菌裂解液裂解后，离心取上清，并对上清进行直链淀粉树脂纯化，经SDS‑PAGE电泳检测，得到融合蛋白MBP‑MART‑1。