[发明专利]一种用于监测漆酶构象变化的免标记紫外吸收光谱法

摘要

本发明公开了一种用于监测漆酶构象变化的免标记紫外吸收光谱法。首先将3-叠氮-7-羟基香豆素与漆酶一起加入到九种不同浓度的尿素溶液中，经充分反应后再用紫外光谱仪在400~700nm范围内采集上述含有3-叠氮-7-羟基香豆素、漆酶和尿素的混合溶液的吸收光谱，最后绘制漆酶在不同尿素浓度条件下的紫外吸收光谱变化趋势图，根据该紫外吸收光谱变化趋势图就能监测漆酶构象变化。本发明在操作过程中仅需要将漆酶、3-叠氮-7-羟基香豆素在尿素溶液中进行简单混合，不需要任何的标记过程就能达到监测漆酶构象变化的目的，大大降低了操作的复杂性，减少了监测时间。此外，本发明用于对漆酶构象变化的监测取得了较为满意的结果，显示出高效、专一、及时、简单的优势。

主权项

一种用于监测漆酶构象变化的免标记紫外吸收光谱法，特征是：具体步骤如下：（1）按照参考文献（Sivakumar, K.; Xie, F.; Cash, B. M. et al., A Fluorogenic 1,3‑Dipolar Cycloaddition Reaction of 3‑Azidocoumarins and Acetylenes. Org. Lett., 2004, 6, 4603‑4606.）所示的方法，采用二羟基苯甲醛、N‑乙酰甘氨酸和叠氮化钠制备3‑叠氮‑7‑羟基香豆素；（2）将5.0 µL 10 mg/mL的漆酶和5.0 µL 0.25 mM 3‑叠氮‑7‑羟基香豆素分别加入至九种不同浓度且均为190 µL的尿素溶液中，九种尿素溶液的具体浓度分别为0.0 M、1.0 M、2.0 M、3.0 M、4.0 M、5.0 M、6.0 M、7.0 M、8.0 M，在4 oC下培育1.0小时，混合后搅拌均匀，促使尿素对漆酶产生变性作用，引起漆酶构象变化；（3）在步骤（2）反应结束后，采用紫外光谱仪在400~700 nm范围内分别采集步骤（2）中九种反应后的尿素溶液的吸收光谱；（4）根据九种尿素溶液的尿素浓度和紫外吸收强度，绘制漆酶在不同尿素浓度条件下的紫外吸收光谱变化趋势图，根据该紫外吸收光谱变化趋势图就能监测漆酶构象变化。