[发明专利]一种用于监测漆酶构象变化的免标记紫外吸收光谱法有效
| 申请号： | 201410002215.7 | 申请日： | 2014-01-03 |
| 公开（公告）号： | CN103712934A | 公开（公告）日： | 2014-04-09 |
| 发明（设计）人： | 邱素艳;林振宇;周瑶敏;罗林广;陈国南 | 申请（专利权）人： | 江西省农业科学院农产品质量安全与标准研究所 |
| 主分类号： | G01N21/31 | 分类号： | G01N21/31;G01N1/28;G01N1/38 |
| 代理公司： | 江西省专利事务所 36100 | 代理人： | 张文 |
| 地址： | 330200 江西*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 监测 构象 变化 标记 紫外 吸收光谱 | ||
1.一种用于监测漆酶构象变化的免标记紫外吸收光谱法，特征是：具体步骤如下：
（1）按照参考文献（Sivakumar, K.; Xie, F.; Cash, B. M. et al., A Fluorogenic 1,3-Dipolar Cycloaddition Reaction of 3-Azidocoumarins and Acetylenes. Org. Lett., 2004, 6, 4603-4606.）所示的方法，采用二羟基苯甲醛、N-乙酰甘氨酸和叠氮化钠制备3-叠氮-7-羟基香豆素；
（2）将5.0 μL 10 mg/mL的漆酶和5.0 μL 0.25 mM 3-叠氮-7-羟基香豆素分别加入至九种不同浓度且均为190 μL的尿素溶液中，九种尿素溶液的具体浓度分别为0.0 M、1.0 M、2.0 M、3.0 M、4.0 M、5.0 M、6.0 M、7.0 M、8.0 M，在4 oC下培育1.0小时，混合后搅拌均匀，促使尿素对漆酶产生变性作用，引起漆酶构象变化；
（3）在步骤（2）反应结束后，采用紫外光谱仪在400~700 nm范围内分别采集步骤（2）中九种反应后的尿素溶液的吸收光谱；
（4）根据九种尿素溶液的尿素浓度和紫外吸收强度，绘制漆酶在不同尿素浓度条件下的紫外吸收光谱变化趋势图，根据该紫外吸收光谱变化趋势图就能监测漆酶构象变化。
2.根据权利要求1所述的免标记紫外吸收光谱法，特征在于：步骤（2）中所述的尿素溶液是由尿素溶解在乙酸缓冲液中配制而成，并将pH值调制为6.0。
3.根据权利要求1所述的免标记紫外吸收光谱法，特征在于：采用紫外光谱仪采集的是步骤（2）中所述的含有3-叠氮-7-羟基香豆素、漆酶和尿素三种物质的混合溶液的吸收光谱。
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