[发明专利]TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法

摘要

本发明涉及一种TNF-α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，属于生物技术领域。内容包括：1)HUVEC细胞培养：HUVEC细胞用M199完全培养基置于37℃，5％CO2的温箱中培养。2)HUVEC样品制备：待细胞长满至80％-90％单层，用15ml的1mg/ml的I型胶原酶消化15-20min制备成细胞悬液，调整细胞浓度为1*106/ml。3)HUVEC细胞同步化：取2ml细胞悬液至6孔板进行培养，当细胞长满至90％时，换无血清的培养基进行饥饿培养24h，使所有细胞同步化。4)TNF-α诱导HUVEC细胞炎症反应：加入终浓度为10ng/ml的TNF-α，刺激HUVEC细胞6h，取细胞上清液ELISA法测定细胞炎症因子MCP-1、ICAM-1、VCAM-1，蛋白含量均升高。本发明建立起的HUVEC炎症反应细胞模型，简便易行，可用于炎症反应机理研究和抗炎药物的体外细胞实验。

主权项

TNF‑α诱导的人脐静脉内皮细胞HUVEC炎症反应模型的制备方法，包括了以下步骤：1)用M199完全培养基(1含酚红、20％新生小牛血清、2mmol／L L‑谷氨酰胺、100U／ml青霉素、100U／ml链霉素、100μg／ml血管内皮细胞生长因子‑肝素)置于37℃，5％CO2的温箱中培养HUVEC细胞2)HUVEC细胞长满至80％‑90％单层，用15ml的1mg/ml的I型胶原酶消化15‑20min制备成细胞悬液，取10ul于血球计数板上计数，调整细胞浓度为1*106／ml。3)取2ml细胞悬液至6孔板进行培养，当细胞长满至90％时，换无血清的培养基进行饥饿培养24h，使所有HUVEC细胞同步化。4)加入终浓度为10ng／ml的TNF‑α，刺激6h，取细胞上清，根据ELISA法，取细胞上清液在酶标仪450nm下测定OD值看细胞炎症因子MCP‑1、ICAM‑1、VCAM‑1，发现蛋白含量均升高。