[发明专利]一种用于筛选抗骨质疏松药物的细胞共培养模型及其应用

摘要

本发明属于细胞体外培养技术领域，建立了骨髓间充质干细胞/破骨前体细胞/卵泡颗粒细胞共培养模型，应用于抗骨质疏松药物的快速筛选。本发明提供的共培养体系，是在上下两层培养系统中，骨髓间充质干细胞和破骨前体细胞在下层培养室直接接触培养，卵泡颗粒细胞贴壁培养在上层培养室的半透膜上：该培养体系是在体外条件下模拟骨组织的骨重建过程；并以药物对碱性磷酸酶、抗酒石酸酸性磷酸酶和雌激素释放的影响，应用于抗骨质疏松药物的快速筛选。

主权项

一种用于筛选抗骨质疏松药物的细胞共培养模型，其特征在于：其包括骨髓间充质干细胞和破骨前体细胞直接接触培养，卵泡颗粒细胞非直接接触培养，按如下步骤制得：于300μL培养容器中，培养容器中部横向设有带孔的半透膜，将培养容器分隔成上下两层培养室，半透膜上孔的直径为0.4‑3微米；取骨髓间充质干细胞于容积80‑150μL下层培养室培养，于下室中加入80‑120μL的含体积浓度10～20%胎牛血清的α‑MEM培养液，细胞密度为0.1～1×105个/ml的骨髓间充质干细胞，待其贴壁后换为含10～1000nM地塞米松、1～10mMβ‑甘油磷酸钠﹑5～50μM磷酸维生素c及含体积浓度20%胎牛血清的α‑MEM培养液进行培养；再培养7～8d后，弃上清，加入破骨前体细胞RAW264.7培养液，培养液加入量50‑120μL，细胞密度为0.1～1×105个/ml，待其贴壁后换为含10～1000nM地塞米松、1～10mMβ‑甘油磷酸钠﹑5～50μM磷酸维生素c、20～100ng/ml RANKL及含体积浓度10～20%胎牛血清的α‑MEM培养液进行培养；继续培养2～4d后，再将细胞密度为0.1～1×105个/ml的100‑120μL的卵泡颗粒细胞培养液加入上层培养室，将培养容器中所有的培养液换为无血清的α‑MEM培养液，置35～37℃，于通入有体积分数为5%的CO2空气的培养箱内培养1～2d。