[发明专利]一种羧甲基赖氨酸的检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种羧甲基赖氨酸(CML)的检测方法，其特征是结合HILIC亲水作用色谱柱在较高有机相比例下对强极性CML的分离，采用高效液相色谱-串联质谱法测定食品中CML含量。粉碎的食品经硼氢化钠还原、盐酸水解后，过MCX阳离子交换小柱萃取净化，样品溶液在HILIC色谱柱中以甲醇-水(均含2mM乙酸铵和0.1％甲酸)为流动相进行梯度洗脱，CML与样品基质分离。选用电喷雾离子源，正离子扫描，多反应监测模式，进行串联质谱分析。以D4-CML为内标物定量分析，分析时间为12min。CML在保留时间3.47min处具有吸收峰。此种新的检测方法灵敏度高、准确度高、精密度好，无需对样品进行衍生化，简化了样品前处理、缩短了检测时间、节省了检测成本。

主权项

一种羧甲基赖氨酸(CML)的检测方法，其特征在于包括如下步骤：称取一定质量的待测样品，任选的包括样品粉碎的步骤；样品在硼酸钠缓冲溶液中经硼氢化钠还原；然后用体积比为1‑3：1三氯甲烷去除脂肪并沉淀蛋白质；沉淀物经盐酸水解后，添加一定量的氘代羧甲基赖氨酸(D4‑CML)，过MCX阳离子交换小柱萃取净化；萃取液经氮吹浓缩后重新溶解在一定体积的体积比为3‑5：1甲醇‑水溶液中，得到待测液；待测液在HILIC色谱柱中以含1‑3mM乙酸铵和0.05‑015％甲酸的甲醇(A)‑水(B)为流动相进行梯度洗脱，D4‑CML和CML通过洗脱与样品基质分离；梯度洗脱参数为0～3min，80％～50％A；3～6min，50％A；6.1min，80％A；6.1～12min，80％A；选用电喷雾离子源(ESI)，正离子扫描，多反应监测模式(MRM)，进行对所分离的洗脱样品进行串联质谱分析，测定质谱图中CML特征峰与相对应的D4‑CML的特征峰的高度之比，通过高度之比和所加入的D4‑CML的量计算待测样品中CML的浓度。