[发明专利]一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法

摘要

本发明提供了一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法，其有效成分为枯草芽孢杆菌50~55份，放线菌10~15份，光合细菌8~10份，淡紫拟青霉6~10份，酵母菌3~5份，双歧杆菌2~4份；该产品是复合配制产品，功能全互补性强，可与化学肥料有机肥料混用，提高上述肥料的利用率30%左右，抗病抑菌，提高地力，活化土壤，增产提质，抗倒伏，降低农残，耐储藏，保花率提高50%、挂果提前7～10天、产量提高15～20%。此外，由于肥料产品中含有白刺链霉菌放线菌，它在抑制黄瓜枯萎病病原真菌生长方面具有非常显著的抑制效果，试验结果表明，在连作黄瓜枯萎病的土壤上施用本产品后，黄瓜枯萎病发病率低于10%。

主权项

一种复合生物有机肥颗粒剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）复合菌粉的制备A、分别制备各菌种的菌液（1）枯草芽孢杆菌菌液的制备：在无菌条件下，将枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis) CICC 23659接入到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：淀粉5﹪、腐植酸钾1%、豆饼粉7.5﹪、磷酸氢二钾0.2﹪、硫酸铵0.1﹪、硫酸镁0.05﹪、三氯化铁0.005﹪、碳酸钙0.05﹪、酵母粉0.01﹪、硼酸0.005﹪，pH值调至7.2～7.4，在120℃左右进行灭菌20 min；发酵过程中培养温度范围28～40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通气量0.5～1.0L∕L•min，搅拌速度150～200rpm，罐压0.5kg∕cm2，耗氧培养48小时，得到的菌液中枯草芽孢杆菌斯氏亚种菌数≥2.0×109cfu/ mL；（2）放线菌菌液的制备在无菌条件下，将白刺链霉菌（Streptomyces albospinus）CGMCC 7434接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：葡萄糖2.9%、黄豆粉1.6 %、可溶性淀粉4%、酵母粉1%、腐植酸钾1%、蛋白胨0.4 %、 硫酸镁 0.05 %、NaCl 0.2 %、 碳酸钙0.5%，pH值调至7.5‑8.0，在120℃左右进行灭菌20 min；发酵过程中培养温度范围28～30℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，无菌空气的通入量2～3L∕L•min，搅拌速度为150~210 rpm，发酵时间60~130小时得到放线菌菌液发酵液，发酵后期将菌丝全部打碎成该菌的菌落形成单位，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.5×109 cfu/ mL；（3）淡紫拟青霉菌菌液的制备在无菌条件下，将淡紫拟青霉 (Paecilomyces lilacinus) CGMCC3.4034接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基按重量百分数计为：可溶性淀粉2%，硝酸钾0.1%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸镁0.05%，氯化钠0.05%，硫酸亚铁0.001%，，pH值调至7.2‑7.4；发酵过程中培养温度为30‑37℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8‑10L/ L•min、发酵时间为12‑24h、搅拌转速为200‑300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥2.0×109 cfu/ mL；（4）酵母菌菌液的制备在无菌条件下，将产朊假丝酵母(Candida utilis) CICC 1422接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规YPD酵母培养基；发酵过程中培养温度为为25‑40℃，通入无菌空气（溶氧）并搅拌，通风量为8‑10L/ L•min、发酵时间为36‑72h、搅拌转速为200‑300 rpm，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×109 cfu/ mL； （5）光合细菌菌液的获得： 在无菌条件下，将球形红杆菌(Phodobacter sphaeroide) ATCC 17023、沼泽红假单胞菌(Phodopseudomonas palustris )ATCC 17001中的一种或组合接种到培养基中，进行液体发酵生产，其中所述的培养基为常规营养琼脂培养基或肉汤培养基；培养条件为25‑40℃光照下厌氧培养36‑48小时，发酵液中该菌的菌落形成单位≥1.0×109 cfu/ mL；（6）双歧杆菌菌液的制备：在无菌条件下，将双歧杆菌（Lactococcus lactis）ACCC 11054接种到液体培养基中，其中所述的培养基按重量百分数计为：番茄汁20%、可溶性淀粉0.05%、蛋白胨1.5%、氯化钠5.0g、酵母菌0.6%、葡萄糖2%，pH值调至7.2，发酵过程中培养温度范围30℃～35℃培养2～3天，得到菌数≥5.0×109cfu/ml的种子培养液，然后接种到50升含有5%（重量百分数）红糖的无菌水中，接种量为无菌水重量的2﹪，在溶氧量为5﹪即发酵罐中氧气的体积与发酵液的体积比为5%的条件下，25℃～30℃于密封罐中静置培养10～15天，得到菌数≥1.0×109cfu/ml的双歧杆菌菌液；B、获得混合菌粉： 通过分别在各菌种的菌液中加入碳酸钙，所述碳酸钙的加入量为菌液总重量的40﹪～50﹪，搅拌30min～40min，脱水浓缩，低温烘干至含水率≤5﹪，粉碎，得到细度≥100目的各菌种的菌粉； 然后将各菌种的菌粉如下比例混合，有效成份按重量份数计：枯草芽孢杆菌50~55份，放线菌10~15份，光合细菌8~10份，淡紫拟青霉6~10份，酵母菌3~5份，双歧杆菌2~4份； C、复配将上述步骤制得的复合菌粉与有机硅和黄腐酸钾复配，重量比分别为：菌粉30%、沸石粉.5%、黄腐酸钾65%，然后进行混合造粒低温烘干，冷却，筛分，检验合格，包装成品，得到复合生物有机肥颗粒剂产品。