[发明专利]β-1,3-1,4葡聚糖酶的高效廉价生产方法

摘要

本发明公开了β-1,3-1,4葡聚糖酶的高效廉价生产方法，包括碎囊毛霉产酶培养、粗酶制备、酶的精制以及精制酶的酶活力及基本常数；本发明具有成本低、繁殖快、发酵产物易于提取分离、发酵周期短和产酶能力强等优点，适合大规模工业化生产。

主权项

β‑1,3‑1,4葡聚糖酶的高效廉价生产方法，其特征在于步骤如下：（1）产酶培养将碎囊毛霉菌种（ATCC编号3.03441）接种于制备好的PDA斜面上，28℃培养48～72h，待孢子成熟即可使用；向培养成熟的试管斜面中注入5mL无菌生理盐水，用接种环或无菌玻棒搅动，刮下碎囊毛霉孢子，振荡均匀并稀释至10⁴个/mL，得到孢子悬液；将麸皮和大麦以1:2比例混合，按50 %(W/V)加入自来水，121℃灭菌10 min，得到固体发酵培养基；将孢子悬液按5%(V/W)接入液体发酵培养基中，26℃培养96h，得到发酵底物；（2）粗酶制备向发酵底物以1:1比例加入pH值5.5的HAc‑NaAc缓冲液100 ml,移入振荡器中200 r/min振荡30分钟，6559×g离心10min，收取上清；（3）酶的精制粗酶液经饱和度80%的硫酸铵盐析，透析24h浓缩处理，再经Sephadex G‑100（葡聚糖凝胶G‑100）柱凝胶过滤后，截取吸光值（OD=280nm）为280nm的组分；得到了电泳纯酶，比酶活达到225.02U/mg。