[发明专利]一种用于皮肤移植脱细胞真皮材料的制备方法

摘要

本发明公开了一种用于皮肤移植脱细胞真皮材料的制备方法，经过对猪皮采用反复冻融结合超声振荡的工艺步骤制备而成的脱细胞真皮材料，是完全通过物理方法充分去除真皮中的细胞成分，降低真皮的免疫原性，而不影响胶原纤维的三维结构及排列极性，并保留完整的基底膜，可作为完整的组织支架，成为真皮再生的模板，脱细胞真皮天然的三维空隙利于成纤维细胞及血管内皮细胞的长入、基质的重建，可作为良好的组织工程真皮应用于临床使用。

主权项

一种用于皮肤移植脱细胞真皮材料的制备方法，采用反复冻融结合超声振荡法的技术方案，具体工艺步骤如下：a.取3月龄中华香猪猪背部皮，经清洗、去毛刀去毛后，以取皮鼓切取厚度为0.25‑0.35毫米中厚皮片备用；b.将皮片无菌塑封袋密封标记后置入‑80℃‑‑90℃超低温冰箱，冷冻6‑8小时后取出，40℃‑‑50℃温水复温，至皮片完全融化，低温冷冻及复温过程重复3次；c.将反复冻融处理过的皮片浸入3％‑5％‑的高渗氯化钠溶液中浸泡30‑40分钟后取出，用蒸馏水反复洗涤后备用；d.将蒸馏水反复洗涤后的皮片平铺放在网格状金属筐内架空的平面网格托层上，将网格状金属筐整体置入充满庆大霉素阴阳离子洗脱液的KQ‑250DB数控超声清洗器内，使皮片完全浸入庆大霉素阴阳离子洗脱液中，进行超声振荡洗涤72小时，超声振荡洗涤过程中每两小时上下颠倒更换金属筐朝向一次，每6小时更换一次洗脱液，当猪皮表皮层已与真皮层松脱后，用镊子将表皮剥除，经反复震荡洗涤72小时后充分脱除细胞；e.将KQ‑250DB数控超声清洗器内的庆大霉素阴阳离子洗脱液置换成庆大霉素蒸馏水进行超声振荡清洗脱除细胞后的皮片，振荡清洗过程中每4小时更换一次蒸馏水，振荡清洗72‑84小时后，使皮片内的洗脱液含量低于万分之一，超声振荡期间洗脱液及蒸馏水的温度控制在25～35℃；f.将步骤e.制备的皮片正反面分别以紫外线照射消毒，并使用碘伏及4000U／L庆大霉素生理盐水溶液浸泡2小时后，制备成用于皮肤移植脱细胞真皮材料，经装袋密封并标记后，以‑80℃‑‑90℃低温冷冻保存备用；g.在临床使用前将低温冷冻保存的真皮材料再次以稀碘伏及庆大霉素生理盐水溶液浸泡2小时。