[发明专利]一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法

摘要

本发明涉及一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法，该方法包括以下步骤：⑴制备马铃薯葡萄糖斜面培养基；⑵制备种子培养基；⑶制备发酵培养基；⑷将美味牛肝菌菌丝接种至马铃薯葡萄糖斜面培养基，经恒温培养得菌丝体；⑸菌丝体接种至种子培养基，经振荡培养得菌种种子液；⑹菌种种子液接种至发酵培养基，经振荡培养得发酵液；离心、洗涤、烘干、磨粉后，得到菌丝体干粉末；⑺菌丝体干粉末先超声提取再浸提得到多糖浸提液；⑻多糖浸提液与正丁醇-三氯乙酸溶液混合后离心后即得多糖提取液；⑼多糖提取液加乙醇静置，得沉淀物；⑽沉淀物离心、洗涤、干燥，即得美味牛肝菌多糖。本发明操作简单，成本低，多糖得率高。

主权项

一种美味牛肝菌菌丝多糖的提取方法，包括以下步骤：⑴制备马铃薯葡萄糖斜面培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液A，该滤液A补足至1.0L依次加入5~10g葡萄糖和5~10g琼脂，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm2、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；⑵制备种子培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液B，该滤液B补足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm2、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；⑶制备发酵培养基：将马铃薯洗净去皮切碎，按其质量的4~6倍加水煮沸25~35min后用纱布过滤，得到滤液C，该滤液C补足至1.0L加入5~10g葡萄糖，使其pH值为6.0~8.0，在90~100℃温度下充分加热溶解后分装，在压强为1.05Kg/cm2、温度为121℃的条件下灭菌20min即得；⑷真菌的发酵培养：接一环美味牛肝菌菌丝至所述马铃薯葡萄糖斜面培养基上，于28℃恒温培养4~10天后，置于4℃冰箱中，得到活化培养后的菌丝体；⑸接一环所述活化培养后的菌丝体至装有10mL所述种子培养基的试管中，并置于恒温振荡器上，在28℃条件下以100~200 r/min的速率进行振荡培养4~10天，制得pH值为5.0~7.0的菌种种子液；⑹将所述菌种种子液按5~20%的接种量接种至含有所述发酵培养基的摇瓶中，并置于恒温振荡器上，在28℃条件下以100~200 r/min的速率进行振荡培养4~10天，即得发酵液；所述发酵液在高速冷冻离心机中于5000r/min离心20min，得到菌丝体；所述菌丝体用蒸馏水洗涤后在真空干燥箱于60℃下烘干至恒重后磨成粉，得到菌丝体干粉末；所述发酵培养基在所述摇瓶中的装瓶量为10~30%；⑺在所述菌丝体干粉末中按1 g：5 mL ~20mL的料液比加入去离子水，在功率为100~300W的条件下超声提取10~20 min后，在温度为70~90℃的条件下浸提次数2~4次，每次1~3h，合并提取液，得到多糖浸提液；⑻将所述多糖浸提液与正丁醇‑三氯乙酸溶液按1mL：1mL的比例，充分混合，在转速150 r/min条件下，振荡15min，再静置45min，用高速冷冻离心机4000r/min离心20min，除掉变性蛋白质，将水相再加入相当于其体积的正丁醇‑三氯乙酸溶液，反复多次直到上清液与有机相中间有清晰的分界面为止，视为蛋白质除尽，即得多糖提取液；⑼在所述多糖提取液中按其体积的2~4倍加入质量浓度为95%的乙醇，在4℃下静置24h，得到沉淀物A；⑽将所述沉淀物A经高速冷冻离心机以4000 r／min离心10 min后，得到沉淀物B，该沉淀物B经无水乙醇多次洗涤后置于真空干燥箱内，经50℃真空干燥至恒重，即得美味牛肝菌多糖。