[发明专利]重组Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白噬菌体展示颗粒及其制备方法与应用无效
| 申请号： | 201310432346.4 | 申请日： | 2013-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN103540605A | 公开（公告）日： | 2014-01-29 |
| 发明（设计）人： | 杨柳;沈克飞;郑华;张邑帆;付利芝;谷山林;熊仲良 | 申请（专利权）人： | 重庆市畜牧科学院 |
| 主分类号： | C12N15/70 | 分类号： | C12N15/70;C12N7/01;C12N15/34;C12N15/66;A61K39/12;A61P31/20;C12R1/92 |
| 代理公司： | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人： | 秦力军 |
| 地址： | 402460 *** | 国省代码： | 重庆;85 |
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| 摘要： | 本发明属于生物领域，特别涉及重组猪圆环病毒PCV2-Cap/Phage展示颗粒的制备和运用，重组Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白噬菌体展示颗粒的制备方法，具体包括：1）优化编码Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白的核苷酸，2）重组质粒的构建，3）重组噬菌体基因组的构建，4）重组Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白噬菌体展示颗粒的制备四个步骤；经动物实验证明重组展示颗粒具有良好的抗原性，可以刺激猪机体产生良好的体液免疫和细胞免疫反应，能够防控II猪圆环病毒感染；本工艺复制所需要的时间短；重组展示颗粒生产成本低；产品使用便捷，保存简单方便，克隆产量高。 | ||
| 搜索关键词： | 重组 圆环 病毒 蛋白 噬菌体 展示 颗粒 及其 制备 方法 应用 | ||
【主权项】：
重组Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白噬菌体展示颗粒的制备方法，具体包括以下步骤：A优化编码Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白的核苷酸以GenBank中编号为HM565924.1的衣壳蛋白的核苷酸序列作为模板，优化后，其序列如SEQ ID NO:1所示，进行人工合成；B重组质粒的构建以人工合成的核苷酸为模板，进行PCR扩增，上游引物为如SEQ ID NO:2所示，下游引物如SEQ ID NO:3所示，循环30次，得PCR产物；将所得PCR产物纯化后，经过E.coRI,HindIII双酶切，回收酶切产物；将酶切产物与同样经过E.coRI,HindIII双酶切的线性表达载体pET28a（+）连接，得重组质粒；C重组噬菌体基因组的构建将所述的重组质粒用E.coRI,HindIII进行双酶切，酶切产物与具有相同粘性末端的T7噬菌体载体的双臂连接，得重组噬菌体基因组；D重组Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白噬菌体展示颗粒的制备将所述重组噬菌体基因组经过体外包装后，转染宿主菌E.coli BLT5403，通过培养裂解宿主菌，得到重组Ⅱ型猪圆环病毒的衣壳蛋白噬菌体展示颗粒。
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