[发明专利]一种利用滨梅枝条获取无菌苗的方法

摘要

本发明公开了一种利用滨梅枝条获取无菌苗的方法。按如下四个步骤进行：（1）配制培养基（2）采集枝条（3）枝条消毒（4）接种。采用本项发明有效降低了滨梅茎段外生菌和内生菌染菌率，死亡率减少到10%以下，无菌苗获得率高于80%。本发明操作简单，成本低廉，易于推广。

主权项

一种利用滨梅枝条获取无菌苗的方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）配制培养基：以MS培养基为基础，其中蔗糖浓度为30g·L‑1，琼脂浓度为8.0g·L‑1，pH5.8；培养基在121℃条件下灭菌20min后冷却备用；（2）采集枝条：在五月下旬选择日光充足的晴天采集生长健壮、无病虫害的一年生枝条，用湿报纸包裹后4℃保藏备用；（3）枝条消毒：取滨梅枝条修剪成长2cm带有2～3个腋芽的茎段，用自来水清洗后，接着用流水冲洗半小时，再用无菌滤纸吸干水分，然后转移至无菌操作台，在无菌条件下，先浸入体积浓度为75%的酒精消毒20～40s，然后用无菌水冲洗3～4次，无菌滤纸吸干水分，后转入质量浓度为0.1%的升汞消毒3～6min，再反复用无菌水冲洗并将茎段两头剪掉0.3～0.5cm，最后再转入质量浓度为3～5‰的制霉菌素溶液处理5～10s；（4）接种：把完成消毒的茎段接种到含蔗糖的MS固态培养基中，在25±2℃，空气相对湿度为65～75%，光照强度为220μEm‑2s‑1，光照时间为14h/d的条件下培养1个月即得无菌苗。