[发明专利]一种调控水稻籽粒大小和粒重的方法

摘要

本发明公开了一种调控水稻籽粒大小和粒重的方法，包括OsABC1-2基因过量表达载体的构建步骤和OsABC1-2过表达转基因植株的获得步骤。本发明通过在粳稻中过量表达OsABC1-2基因，显著提高了种子大小和粒重，并增强了对黑暗处理诱导叶片衰老的抗性。因而，该基因是水稻粒型性状的一个新的调控因子，在提高水稻的种子大小和粒重以及增加作物产量上具有潜在的工业应用价值，产生更高的经济效益。

主权项

一种调控水稻籽粒大小和粒重的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）OsABC1‑2基因过表达载体的构建以野生型粳稻品种中花11 cDNA为模板，设计一对引物，扩增OsABC1‑2基因，引物序列如下：OsABC1‑2OE‑F：5’‑AAAAGGATCCCGCCCTCGCGATGTCGGCC‑3’，OsABC1‑2OE‑R：5’‑AAAAACTAGTCCGATGGCTATGCTACAACG‑3’，在引物两端分别引入了限制性内切酶BamH I和Spe I的识别位点；PCR扩增产物用胶回收试剂盒（TaKaRa, 805A）纯化，并利用BamH I和Spe I酶切后，连入用相同限制性酶切割的pCAMBIA1301‑UbiNOS载体；重组质粒采用热击转化法转化大肠杆菌DH5α，转化物在含卡那霉素的LB平板上筛选，挑选阳性克隆，提取质粒后测序验证正确，获得OsABC1‑2过表达载体；其中，OsABC1‑2基因序列如SEQ ID NO.1所示；2）OsABC1‑2过表达转基因植株的获得将测序正确的OsABC1‑2过表达载体通过电击法转入农杆菌菌株EHA105中；将粳稻品种中花11未成熟种子带壳灭菌，在超净工作台上分离出未成熟胚，接种在诱导愈伤培养基上；暗培养6d后挑选生长旺盛，颜色浅黄的胚性愈伤组织，作为转化的受体；将带有OsABC1‑2过表达重组质粒的农杆菌EHA105菌株培养至对数生长期，离心收集菌体，并用加入乙酰丁香酮的AAM培养基重悬后，倒入愈伤组织进行侵染；侵染结束后的愈伤组织在共培养基上培养3d，然后在含有50 mg L‑1潮霉素的选择培养基上筛选抗性愈伤组织，经两代筛选以后，将抗性愈伤组织进行预分化处理和分化再生；再生小苗转入1/2MS培养基上生根壮苗；小苗经练苗处理后移入大田种植。