[发明专利]一种调控水稻籽粒大小和粒重的方法

权利要求书

1.一种调控水稻籽粒大小和粒重的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）OsABC1-2基因过表达载体的构建

以野生型粳稻品种中花11 cDNA为模板，设计一对引物，扩增OsABC1-2基因，引物序列如下：

OsABC1-2OE-F：5’-AAAAGGATCCCGCCCTCGCGATGTCGGCC-3’，

OsABC1-2OE-R：5’-AAAAACTAGTCCGATGGCTATGCTACAACG-3’，

在引物两端分别引入了限制性内切酶BamH I和Spe I的识别位点；PCR扩增产物用胶回收试剂盒（TaKaRa, 805A）纯化，并利用BamH I和Spe I酶切后，连入用相同限制性酶切割的pCAMBIA1301-UbiNOS载体；重组质粒采用热击转化法转化大肠杆菌DH5α，转化物在含卡那霉素的LB平板上筛选，挑选阳性克隆，提取质粒后测序验证正确，获得OsABC1-2过表达载体；其中，OsABC1-2基因序列如SEQ ID NO.1所示；

2）OsABC1-2过表达转基因植株的获得

将测序正确的OsABC1-2过表达载体通过电击法转入农杆菌菌株EHA105中；将粳稻品种中花11未成熟种子带壳灭菌，在超净工作台上分离出未成熟胚，接种在诱导愈伤培养基上；暗培养6d后挑选生长旺盛，颜色浅黄的胚性愈伤组织，作为转化的受体；将带有OsABC1-2过表达重组质粒的农杆菌EHA105菌株培养至对数生长期，离心收集菌体，并用加入乙酰丁香酮的AAM培养基重悬后，倒入愈伤组织进行侵染；侵染结束后的愈伤组织在共培养基上培养3d，然后在含有50 mg L^-1潮霉素的选择培养基上筛选抗性愈伤组织，经两代筛选以后，将抗性愈伤组织进行预分化处理和分化再生；再生小苗转入1/2MS培养基上生根壮苗；小苗经练苗处理后移入大田种植。

2.根据权利要求1所述的调控水稻籽粒大小和粒重的方法，其特征在于：所述OsABC1-2基因表达蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

3.根据权利要求1所述的调控水稻籽粒大小和粒重的方法，其特征在于：用于realtime PCR检测OsABC1-2基因的特异性引物OsABC1-2F和OsABC1-2R，引物序列如下：

OsABC1-2F：5’-AAGTCAGATGGTGCCAAGAG-3’

OsABC1-2R：5’-AACAGCATACCGACCTAACC-3’。