[发明专利]一种具有抗肿瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制备方法：将裂片石莼粉碎后用水超声提取，醇沉制得粗多糖，用装填有弱碱性阴离子交换树脂的径向流色谱柱进行脱色素脱蛋白，洗脱后按分子量进行超滤分离，取分子量10KD至30KD的裂片石莼多糖组分加入装填有DEAE琼脂糖凝胶的径向流色谱柱进行富集提纯，制备的平均分子量为20KD多糖具有显著的抗肿瘤活性。

主权项

一种具有抗肿瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制备方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：(1)将裂片石莼洗净、干燥后粉碎，过100目筛，得粉碎物；(2)称取步骤(1)得到的粉碎物，加入质量为粉碎物60～70倍的蒸馏水，在400‑500W的超声条件下提取30～40分钟，然后冷却静置，离心分离，取上清液a；(3)将步骤(2)得到的上清液a旋转蒸发浓缩至体积为原体积的10%～15%，加入体积分数95%的乙醇溶液使乙醇的终体积浓度为80%，静置10～20小时，离心分离，所得沉淀冷冻干燥，得粗多糖a；(4)将步骤(3)得到的粗多糖a加水配制成质量浓度5～10mg/ml的溶液，离心分离后，取上清液b过0.45μm微孔滤膜，得滤液b；(5)将步骤(4)得到的滤液b加入装填有弱碱性阴离子交换树脂的径向流色谱柱中进行脱色素脱蛋白，上样后用蒸馏水洗脱，径向流色谱的条件为：上样流速/柱高为1‑2ml/（min·cm），洗脱速度/柱高为8‑12ml/（min·cm），洗脱至流出液不再发生苯酚‑硫酸法显色反应，表示洗脱完毕，收集所有洗脱液，浓缩、冷冻干燥得粗多糖b；(6)将步骤(5)得到的粗多糖b加水配制成质量浓度3～10mg/ml的溶液，通过100KD的超滤膜，膜压力控制在0～30psi，收集截留液A，浓缩、冷冻干燥得分子量100KD以上的裂片石莼多糖组分A，将滤过液A再通过30KD的超滤膜，膜压力控制在0～30psi，收集截留液B，浓缩、冷冻干燥得分子量30KD至100KD的裂片石莼多糖组分B，将滤过液B再通过10KD的超滤膜，膜压力控制在0～30psi，收集截留液C，浓缩、冷冻干燥得分子量10KD至30KD的裂片石莼多糖组分C，滤过液C浓缩、冷冻干燥得分子量10KD以下的裂片石莼多糖组分D；(7)称取步骤(6)所得的分子量10KD至30KD的裂片石莼多糖组分C加水配制成质量浓度5～10mg/ml的溶液，离心分离后，取上清液c过0.45μm微孔滤膜，得滤液c；将滤液c加入装填有DEAE琼脂糖凝胶的径向流色谱柱中，上样后用蒸馏水洗脱，径向流色谱的条件为：上样流速/柱高为1‑2ml/（min·cm），洗脱速度/柱高为8‑12ml/（min·cm），洗脱至流出液不再发生苯酚‑硫酸法显色反应，表示洗脱完毕，检测洗脱液中多糖成分的分子量，收集分子量范围为18～22KD的洗脱液，浓缩、冷冻干燥得到平均分子量为20KD的多糖组分，即为裂片石莼硫酸多糖。