[发明专利]血浆中肌苷含量的测定方法

摘要

本发明公开了一种测定人体血浆中肌苷含量的方法，它包括如下步骤：（a）在人体空白血浆250ul中加入肌苷标准品溶液25ul，配制成至少五份不同浓度的肌苷血浆溶液，再分别加入0.1ug/ml拉米夫定标准液25ul和4.25%磷酸溶液250ul，涡流混合，得混合溶液；将所述混合溶液分别加入经活化的HLB固相萃取柱中进行洗脱，弃洗脱液，再用1ml流动相溶液洗脱，收集洗脱液，离心，取上清液；（b）将经步骤（a）制得的上清液在特定的质谱和色谱条件下进行LC/MS/MS分析（c）基于步骤（b）的分析结果，用同样的方法建立当日的标准曲线及定量下限进行计算，得到待测人体血浆中的肌苷含量。

主权项

一种建立人体血浆肌苷LC/MS/MS测定标准曲线及定量下限的方法，其特征在于，它包括如下步骤：（a）在人体空白血浆250ul中加入肌苷标准品溶液25ul，配制成至少五份不同浓度的肌苷血浆溶液，再分别加入0.1ug/ml拉米夫定标准液25ul和4.25%磷酸溶液250ul，涡流混合，得至少五份混合溶液；将所述混合溶液分别加入经活化的HLB固相萃取柱中进行洗脱，弃洗脱液，再用1ml流动相溶液50mM CH3COONH2:CH3OH=1:1洗脱，收集洗脱液，离心，取上清液；（b）将经步骤（a）制得的上清液在下述条件下进行LC/MS/MS分析质谱条件：Compound（化合物参数）：肌苷母子离子对：269.1/137.1，time:400msec拉米夫定母子离子对：230.2/112.2，time:200msecDuration：4minCycles：393DP=26CE=15CXP=4CEP=4Q1resolution：UnitQ2resolution：Unit，Source/Gas（离子源/气参数）：Ion Source：Turbo SprayCurtain Gas（CUR）：10Collision Gas（CAD）：MediumIon Spray Voltage（IS）：5000Temperature（TEM）：700Ion Source Gas1（Gas1）：60Ion Source Gas2（Gas2）：10Interface Heater（ihe）：ON，液相色谱条件：色谱柱：Waters XBridgeTM C18，规格：3.5um，2.1×100mm，Part No.:186003022，S/N:01453030814045流动相：50mM CH3COONH2:CH3OH=1:1流速：0.2ml/min进样量：10ul进样时间：4min；（c）基于步骤（b）的分析结果，建立人体血浆肌苷LC/MS/MS测定的标准曲线及定量下限。