[发明专利]一种从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法

摘要

本发明涉及一种从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，包括以下步骤：制备连续梯度的蔗糖溶液，制备混合病毒液，制备病毒悬液，密度梯度离心。本发明分离方法能有效的获得单一纯化的病毒，为临床上混合感染多种病毒的临床样品的分离纯化提供了切实可行的分离方法，特别是对于新出现的毒株或者变异株在常规方法无法分离的情况下，蔗糖连续密度梯度离心能准确、快速的完成病毒分离的工作，为疫病的研究和防控打下基础。

主权项

一种从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：1）制备连续密度梯度的蔗糖溶液：从上向下依次采用浓度为20%、30%、40%和50%的蔗糖溶液，4℃过夜得到连续密度梯度的蔗糖溶液；2）制备混合病毒液：对病料中分离得到的新型鸭呼肠孤病毒与番鸭呼肠孤疫苗株的混合病毒，进行扩大培养，得到混合病毒液；3）制备病毒悬液：在浓缩管中加入混合病毒液，然后在管底加入低浓度蔗糖溶液，冷冻离心，浓缩后将沉淀溶于少量PBS中制成病毒悬液；4）密度梯度离心：将步骤3）制得的病毒悬液加入步骤1）中的连续密度梯度的蔗糖溶液中，冷冻离心后，将离心液等分成若干份，得到含有单一的新型鸭呼肠孤病毒的样品。