[发明专利]一种从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法

权利要求书

1.一种从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）制备连续密度梯度的蔗糖溶液：从上向下依次采用浓度为20%、30%、40%和50%的蔗糖溶液，4℃过夜得到连续密度梯度的蔗糖溶液；

2）制备混合病毒液：对病料中分离得到的新型鸭呼肠孤病毒与番鸭呼肠孤疫苗株的混合病毒，进行扩大培养，得到混合病毒液；

3）制备病毒悬液：在浓缩管中加入混合病毒液，然后在管底加入低浓度蔗糖溶液，冷冻离心，浓缩后将沉淀溶于少量PBS中制成病毒悬液；

4）密度梯度离心：将步骤3）制得的病毒悬液加入步骤1）中的连续密度梯度的蔗糖溶液中，冷冻离心后，将离心液等分成若干份，得到含有单一的新型鸭呼肠孤病毒的样品。

2.根据权利要求1所述的从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，步骤1）中浓度为20%、30%、40%和50%的蔗糖溶液的体积比为1:1:1:1。

3.根据权利要求1所述的从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，步骤3）中低浓度蔗糖溶液为15-25%浓度的蔗糖溶液。

4.根据权利要求1所述的从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，步骤3）中的冷冻离心为40,000rpm，4℃离心60min。

5.根据权利要求1所述的从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，步骤4）中的冷冻离心为26,500rpm，4℃离心120min。

6.根据权利要求1所述的从混合病毒样品中分离新型鸭呼肠孤病毒的方法，其特征在于，步骤4）中的加入病毒悬液的体积为加入连续密度梯度的蔗糖溶液体积的10%-15%。