[发明专利]一种检测HER2和MUC4蛋白表达的方法及其在癌症治疗中的应用

摘要

本发明提供了一种检测HER2和MUC4蛋白表达的方法及其在乳腺癌个性化治疗中的应用。本发明通过免疫组化染色乳腺癌患者的病理组织，可检测HER2和MUC4在乳腺癌组织中的表达情况，该方法操作简便，检测准确，通过显微镜观察拍照，检测结果更加直观；本发明的方法检测乳腺癌患者对曲妥珠单抗的耐药性，可为乳腺癌患者的诊断、治疗和评价提供依据，可以防止盲目的使用曲妥珠单抗（赫赛汀）给患者带来的治疗时机的错失以及经济损失。

主权项

一种检测HER2和MUC4蛋白表达的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A. 免疫组化1）取乳腺癌患者的病理组织进行石蜡包埋切片，放置于60℃烘箱中20~30min，将所述石蜡切片脱蜡至水，得到所述脱蜡后的切片；2）将所述脱蜡后的切片置于二甲苯中10min，更换二甲苯再浸泡10min，而后无水乙醇浸泡5min，95%乙醇浸泡5min，80%乙醇浸泡5min，75%乙醇浸泡5min，70%乙醇浸泡5min，PBS浸泡5min并更换PBS重复浸泡3次，得到初步处理后的切片；3）将所述初步处理后的切片置于3% H2O2室温孵育10~20min，以消除内源性过氧化物酶的活性，得到灭酶处理后的切片；4）用蒸馏水冲洗所述灭酶处理后的切片，而后PBS浸泡5min并更换PBS重复浸泡3次，得到清洗后切片；5）抗原修复：将所述清洗后切片放入抗原修复液中，并置于微波炉内加热，温度为92~98℃，然后室温放置8~10min，重复上述步骤3次，得到抗原修复后的切片；6）将所述抗原修复后的切片放置于山羊血清工作液中，室温孵育20~30min后，除去所述山羊血清工作液，向所述切片中滴加一抗工作液，37℃孵育1~2小时或4℃孵育过夜，得到一抗处理后的切片；7）将所述一抗处理后的切片置于PBS浸泡5min，并更换PBS重复浸泡3次；8）向上述处理后的切片中滴加适量生物素标记二抗工作液，37℃孵育30~60min，得到二抗处理后的切片；9）将所述二抗处理后的切片置于PBS浸泡5min，并更换PBS重复浸泡3次；10）向上述处理后的切片中滴加适量SABC工作液，37℃孵育30~60min；11）将上述处理后的切片置于PBS浸泡5min，并更换PBS重复浸泡4次；12）DAB显色：将上述处理后的切片置于DAB中室温显色，在显微镜下观察切片的显色过程，反应时间控制在5~10min，用蒸馏水冲洗切片，得到显色后切片；13）复染：向所述显色后切片上滴加苏木素，轻度复染所述切片，而后用盐酸酒精分化所述切片30~60s，自来水冲洗所述切片5~10min，得到复染后的切片；14）脱水、透明、封片：将所述复染后的切片，依次70%乙醇浸泡5min 75%乙醇浸泡5min，80%乙醇浸泡5min，90%乙醇浸泡5min，95%乙醇浸泡5min并重复3次，100%乙醇浸泡5min并重复3次，二甲苯浸泡20min并重复3次，中性树胶封片；B. 显微镜观察拍照，即可检测出病理组织中HER2和MUC4蛋白的表达情况。