[发明专利]一种检测HER2和MUC4蛋白表达的方法及其在癌症治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及核酸、蛋白质检测方法，特别涉及一种检测HER2和MUC4蛋白表达的方法及其应用。

背景技术

乳腺癌目前是世界各地女性中发病率最高，并且成为女性因癌症死亡的主要因素。随着全球人口老龄化及世界总人口的持续增长，以及在发展中国家及地区医疗设施的落后，癌症的发病率急剧上升。根据2011年A Cancer Journal for Clinicians 在线出版了《Global Cancer Statistics》全球肿瘤统计报告中显示，约有1270万癌症病例和760万癌症死亡者进行了评估，其中约56%的癌症病例和64%的癌症死亡者来自发展中国家或地区。乳腺癌在女性中发病率高，并且为女性癌症死亡的主要因素，占所有女性癌症病例的23%和癌症死亡数的14%。与十几年前相比，发展中国家或地区的女性癌症死亡的主因已从以宫颈癌为最常见原因，转变为以乳腺癌。甚至，发展中国家或地区的女性肺癌死亡率与宫颈癌一样高，以上两项均占女性癌症死亡数的11%。虽然发展中国家或地区中两性癌症总发病率为发达国家或地区的一半，但是癌症的死亡率却是相似的。发展中国家或地区中癌症患者将更加贫穷，大概是因为患者晚期就诊及没有得到适时的、标准化的治疗。

在所有的乳腺癌患者中，HER2的过表达与之密切相关。研究发现 20%-25%的乳腺癌患者存在 HER2 基因的过表达或扩增。过表达的 HER2 与其他受体（尤其是 HER3）形成亲和力更强的异源二聚体，表现出更强的信号传导能力。如激活 MAPK 通路，进一步激活其转录因子 c-myc、c-jun 等，促进肿瘤的增殖、转化；激活 PI3K/AKT通路，活化的 AKT 可促使 p53 降解，还可以激活核因子-κB(NF-κB），降低 TNF-α的抗肿瘤能力。除此之外，高表达的 HER2 还可以抵抗他莫昔芬对雌激素受体阳性乳腺癌的治疗作用，这可能与 HER2 减低类固醇激素的表达有关。HER2 分子在乳腺癌发生发展及治疗耐药中起着重要的作用。

曲妥珠单抗（赫赛汀）是重组人源化单克隆抗体，能与 HER2 的胞外区域特异性结合，是美国食品药品监督管理局（FDA）批准的第一个用于治疗 HER2 过表达转移性乳腺癌的生物治疗药物。研究显示，在HER2阳性乳腺癌妇女中，赫赛汀作为单药治疗、联用标准化疗或在标准化疗后使用，均可提高反应率、无病生存期和总生存期，同时保证生活质量。自1998年以来，赫赛汀已经在全世界用于治疗超过45万名HER2阳性乳腺癌患者。

然而曲妥珠单抗（赫赛汀）对于患者的治疗费用也是相当可观的，在中国药用曲妥珠单抗一个疗程大概需要200,000人民币。曲妥珠单抗用于治疗HER2过表达的转移性乳腺癌患者，取得了较好的治疗效果，然而其单独治疗客观反应率却不高，9 个月的中位生存期只有 12%-34%，并且多数患者在使用该药一年之内就产生了耐药。

综上所述，目前急需一种能够准确检测乳腺癌患者对曲妥珠单抗抗药性的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测HER2（人类表皮生长因子受体2，human epidermalgrowth factor receptor-2)和MUC4蛋白（4型黏蛋白）表达的方法，并且所述方法可用于检测乳腺癌患者对曲妥珠单抗的耐药性。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种检测HER2和MUC4蛋白表达的方法，所述方法包括以下步骤：

A. 免疫组化

1）取乳腺癌患者的病理组织进行石蜡包埋切片，放置于60℃烘箱中20~30min，将所述石蜡切片脱蜡至水，得到所述脱蜡后的切片；

2）将所述脱蜡后的切片置于二甲苯中10min，更换二甲苯再浸泡10min，而后无水乙醇浸泡5min，95%乙醇浸泡5min，80%乙醇浸泡5min，75%乙醇浸泡5min，70%乙醇浸泡5min，PBS浸泡5min并更换PBS重复浸泡3次，得到初步处理后的切片；

3）将所述初步处理后的切片置于3% H₂O₂室温孵育10~20min，以消除内源性过氧化物酶的活性，得到灭酶处理后的切片；

4）用蒸馏水冲洗所述灭酶处理后的切片，而后PBS浸泡5min并更换PBS重复浸泡3次，得到清洗后切片；

5）抗原修复：将所述清洗后切片放入抗原修复液中，并置于微波炉内加热，温度为92~98℃，然后室温放置8~10min，重复上述步骤3次，得到抗原修复后的切片；