[发明专利]一种特异性清除甲状旁腺激素的血液净化吸附剂的制备方法

摘要

本发明涉及一种用于特异性清除甲状旁腺激素的血液净化吸附剂的制备方法。该方法包括基因重组人甲状旁腺激素的表达与纯化，蛋鸡免疫与特异性IgY的获得，特异性IgY的固载及吸附剂效果的评价。本吸附剂由固相载体基质和特异性IgY配基两部分组成，能够有效吸附人血清中的甲状旁腺激素，且制备成本低，物理化学性质稳定，可作为血液净化装置的吸附填料用于甲状旁腺功能亢进患者血液中甲状旁腺激素的清除。

主权项

一种特异性清除甲状旁腺激素的血液净化吸附剂的制备方法，其特征在于，吸附剂由固相载体基质和特异性IgY配基两部分组成，其中配基IgY通过以重组表达的人甲状旁腺激素为抗原免疫蛋鸡获取卵黄经免疫亲和纯化得到，并化学偶联固定到载体基质上；所述的人甲状旁腺激素的制备方法为：（1）人甲状旁腺激素的重组表达：化学合成人甲状旁腺激素基因，在基因两端引入BamH Ⅰ和Nde Ⅰ酶切位点，双酶切连接插入pET23a中，并在大肠杆菌BL21（DE3）内进行表达；（2）人甲状旁腺激素的纯化：收集菌体，超声破碎，离心取上清，依次利用聚乙烯亚胺沉淀，硫酸铵沉淀，等电点沉淀，SP强阳离子交换层析纯化得到目标蛋白；所述的特异性IgY的制备方法为：（1）抗原制备与动物免疫：160日龄蛋鸡初次免疫人PTH，每只鸡肌肉、皮下三点注射，两次免疫之间间隔2周，共计免疫4次；（2）卵黄抗体的提取和纯化：分离蛋黄，按1:4～1:10的比例加入双蒸水，1M HCl调节pH至5.0，4℃静置8h；依次利用盐析和免疫亲和纯化方法得到特异性IgY；该吸附剂制备方法包括如下步骤：（1）活化，若用羰基二咪唑活化载体基质，羰基二咪唑加入量为0.1‑0.3g/mL湿基质，15‑30℃反应1‑2h；若用环氧氯丙烷活化载体基质，环氧氯丙烷加入量为0.1‑0.3mL/mL湿基质，15‑30℃反应1‑2h，产物用蒸馏水洗涤；（2）偶联配基，特异性IgY硼酸缓冲液与活化基质在15‑30℃反应1‑2h。