[发明专利]花*精子超低温冷冻保存和复苏方法

摘要

本发明公开了一种花精子超低温冷冻保存和复苏方法，具体为选择形态正常、生长良好、健康无疾病、达到性成熟的亲本，对其进行激素诱导，促使精子成熟，采精，稀释，添加抗冻剂，液氮冷冻保存后，解冻，进行人工授精。本发明具有操作时间短、成本低、操作方便、保存时间长、损伤程度小、复苏后精子成活率较高等优点，在花的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。

主权项

1.一种花精子超低温冷冻保存和复苏方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）亲本选择：选择形态正常、生长良好、健康无疾病、达到性成熟的花雄鱼作为亲本，（2）取精：对性成熟的雄鱼注射催产剂，在水温16-18℃环境中暂养16-20h后，轻压鱼腹，取精液；（3）冷冻：将精液与稀释液按1:2-3的体积比混合均匀，2-4℃下平衡20-30min后，加入抗冻剂DMSO混匀得混合精液，分装至离心管中，置于液氮液面上方4-7cm处平衡15-20min，然后再置于液氮液面上平衡5-8min，再放入液氮中保存；（4）复苏：从液氮中取出装有精液的离心管，置于液氮蒸汽中平衡5-10min，然后迅速置于37±1℃水浴中快速晃动至融化得解冻精液；（5）人工授精：将解冻精液与花鱼卵混合进行人工授精。