[发明专利]一种胸腺五肽分子印迹磁性微球的制备方法

摘要

本发明提出一种胸腺五肽分子印迹磁性微球的制备方法。首先制备油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子，然后在十二烷基硫酸钠做表面活性剂下，以过硫酸钾为引发剂，二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂，利用甲基丙烯酸甲酯和甲基丙烯酸制备羧基功能化的Fe3O4磁性纳米粒子。最后以胸腺五肽为模板分子、丙烯酰胺为功能单体、二甲基丙烯酸乙二醇酯为交联剂、羧基功能化的Fe3O4为磁性载体，成功制备出胸腺五肽分子印迹磁性微球。本发明所述制备方法反应条件温和，印迹效率高，磁性微球粒径可控，吸附量高且易分离。该制备方法将分子印迹聚合物的专一识别特性和磁性微球易在外界磁场作用下分离的特性合二为一，因此在分离、富集、检测、药物靶向治疗等领域有着广泛的应用前景。

主权项

一种胸腺五肽分子印迹磁性微球的制备方法，其特征在于步骤如下：步骤1：按照摩尔比1:2将FeCl2·4H2O和FeCl3·6H2O溶于蒸馏水，在30℃、氮气保护下混合搅拌，然后滴加1mol/L的NaOH溶液使得pH达到11，得到黑色浑浊溶液；采用盐酸黑色浑浊溶液pH=7，加入蒸馏水体积5%的油酸，升温至80℃，在800rmp·min‑1转速下机械搅拌2h后，在外磁场作用下分离出黑色固态物质；采用蒸馏水和无水乙醇交叉洗涤多次，在30℃下真空干燥24h，得到油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子；步骤2：将油酸改性的Fe3O4磁性纳米粒子按照0.5g/mL加入正己烷中超声分散，形成油基磁流体；步骤3：将浓度为3.5mg/mL的十二烷基硫酸钠水溶液，加入到油基磁流体中，形成磁性模板乳液，再依次加入甲基丙烯酸甲酯MMA和甲基丙烯酸MAA，在60～70℃、800r/min转速下机械搅拌2h，继续加入0.01g的过硫酸钾KPS、0.4～0.6mL的二甲基丙烯酸乙二醇酯EGDMA，热引发聚合20h，得到羧基功能化的Fe3O4磁性纳米粒子；所述甲基丙烯酸甲酯MMA和甲基丙烯酸MAA的体积比为2:1～4:1；步骤4：将胸腺五肽TP‑5和丙烯酰胺AM溶于蒸馏水中，在25℃下预聚合20～60min后，加入该蒸馏水质量的1.2%的羧基功能化的Fe3O4磁性纳米粒子，室温超声15min，形成水相混合液；所述胸腺五肽TP‑5和丙烯酰胺AM的摩尔比为1:20～1:28；步骤5：在800r/min搅拌作用下，向水相混合液中依次加入0.3～0.5mL的EGDMA、1.5mg/mL的过硫酸钾溶液1mL，在30℃水浴中热引发聚合5～7h后，冷却至室温，采用蒸馏水和无水乙醇交叉洗涤多次，在30℃下真空干燥24h，得到分子印迹磁性微球；步骤6：将分子印迹磁性微球加入到磷酸盐缓冲液与甲醇的混合溶液中，在25℃、120rmp·min‑1转速下摇床振荡10h以洗脱胸腺五肽TP‑5；再用蒸馏水洗涤多次，在25℃下真空干燥24h，得到胸腺五肽分子印迹磁性微球；所述磷酸盐缓冲液与甲醇的体积 比为60:40。