[发明专利]一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法

摘要

本发明提供了一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，向血浆溶液中添加可溶性无机盐和亲水性有机溶剂，形成双水相萃取体系，得富含血浆功能性蛋白的上相萃取液；萃取液再经疏水层析和离子交换层析进一步分离纯化后，得到电泳纯度高于95%的血浆功能性蛋白。本发明简化了血浆功能性蛋白的纯化步骤，有机溶剂/盐双水相萃取具有溶剂回收方便、成本低、分相时间短、无须反萃取操作、能够选择性去除血浆中葡萄糖以及部分蛋白杂质；萃取液直接利用疏水层析和离子交换层析分离纯化，避免了脱盐的繁琐步骤，大幅提高血浆功能性蛋白质的分离纯化效果。本发明解决了制约血浆蛋白中功能性蛋白质分离纯化中分离步骤繁琐、成本高、纯度低等问题。

主权项

一种血浆中功能性蛋白质的分离纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）向血浆溶液中添加可溶性无机盐Ⅰ和亲水性有机溶剂，搅拌均匀，形成双水相萃取体系，静置后，收集上相萃取液；（2）步骤（1）的上相萃取液经蒸馏回收溶剂后，过Phenyl Sepharose6FFTM疏水层析柱，先用平衡液Ⅰ洗脱至无蛋白流出，再用洗脱液Ⅰ梯度洗脱，收集功能性血浆蛋白馏分；（3）步骤（2）的功能性血浆蛋白馏分经透析得蛋白样品溶液，过Q Sephrose FF或DEAE Sephrose FF离子交换层析柱，先用平衡液Ⅱ洗脱至无蛋白流出，再用洗脱液Ⅱ梯度洗脱，得高纯度血浆功能性蛋白；其中所述可溶性无机盐Ⅰ为磷酸盐、碳酸盐、硫酸盐、卤化物、柠檬酸盐中的一种或两种以上的混合物；所述亲水性有机溶剂为乙醇、甲醇、正丙醇、异丙醇、异丁醇、乙二醇或丙酮中的一种；所述平衡液Ⅰ含有0.2～3mol/L可溶性无机盐Ⅱ和5～50mmol/L缓冲液；所述洗脱液Ⅰ含有0～1mol/L可溶性无机盐Ⅱ和5～50mmol/L缓冲液；所述平衡液Ⅱ含有5～50mmol/L缓冲液；所述洗脱液Ⅱ含有0～1mol/L可溶性无机盐Ⅱ和5～50mmol/L缓冲液；所述可溶性无机盐Ⅱ为磷酸氢二钾、柠檬酸钠、氯化钠中的一种或两种以上的混合物；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液、Tris‑HCl缓冲液、巴比妥钠‑盐酸缓冲液中的一种。