[发明专利]一种罗布麻栅锈菌的扩繁方法

摘要

本发明公开了一种罗布麻栅锈菌的扩繁方法，通过离体叶片接种前消毒、离体叶片培养、离体叶片接菌、活体接菌前处理、接种、保湿、初次扩繁、二次扩繁、大量扩繁、制作孢子悬浮液、接种扩繁步骤完成。本发明能够批量提供罗布麻栅锈菌，以满足实验对菌源的需要，进而为罗布麻栅锈菌防治提供理论依据，保证种植罗布麻的高产和可持续性和罗布麻种植产业的健康发展。

主权项

一种罗布麻栅锈菌的扩繁方法，其特征在于通过以下技术步骤实现的：离体叶片接种前消毒：用浓度为70～75%的酒精浸泡滤纸（直径9cm）2分钟后晾干，铺在培养皿中，采摘罗布麻活体叶片，用浓度为0.3～0.5%的次氯酸钠溶液消毒3～5分钟，再用无菌水冲洗3～5次；离体叶片培养：将冲洗好的罗布麻叶片平铺在滤纸表面，用滴管向滤纸滴上无菌水，至有水膜产生为止；离体叶片接菌：采集新鲜自然发病的罗布麻锈病病叶，铺在标本纸或卫生纸压紧带回室内，用接种针蘸取少量凡士林，挑取病叶夏孢子堆中的夏孢子，涂抹在离体叶片上，一个叶片涂抹8～12次，然后放在培养皿中并密封皿口，在20～28℃下，光暗交替环境培养6～14天，之后将产孢的离体叶片夹在吸水纸中保存在0～5℃环境中，所述的光暗交替为每10～14h光暗交替一次；活体接菌前处理：用喷壶均匀的向罗布麻叶片背部喷无菌水，至有水滴产生为止，破坏叶片表面的角质层；接种：接种后将病叶与罗布麻健康叶片触擦，一片病叶触擦一片健康的叶片；一次接种至少触擦20～50个叶片；保湿：将接种完的罗布麻植株放在保湿玻璃罩内，用保鲜膜封口，保湿48～60小时，期间每10～14小时光暗交替变换一次，光照强度在10000～12000LUX；初次扩繁：摘取接种成功的病叶，按照步骤（5）所描述接种方法，按一个病叶触擦2～4个健康叶片，继续触擦健康叶片背部，然后在保湿玻璃罩内封口保湿48～60小时；二次扩繁：用手指蘸无菌水直接搓压叶片上的夏孢子堆，并向病叶和健康叶片各部位涂抹，使孢子均匀分布，继续保湿48～60小时；大量扩繁：菌种收集，将接菌扩繁后的罗布麻植株平放并略微向下倾斜15～20°，然后用手背轻拍病叶或茎干，使孢子抖落在平铺的硫酸纸上，最后将孢子收集入塑料离心管或类似容器中，保存在‑18～‑22℃环境中；制作孢子悬浮液：按500 ml无菌水加入0.5～1.5g的新鲜夏孢子的比例，同时加入0.05～0.1ml吐温‑20作为展布剂，震荡均匀后得孢子悬浮液；接种扩繁：轻轻摩擦叶片，破坏叶片角质层，然后用无菌水冲洗叶片，将配置好的孢子悬浮液喷洒在叶片背面至有水滴出现为止，最后将植株放入容器中，封口处保留10～15个昆虫针大小的小洞，容器内温度保持在20～28℃，空气相对湿度在85～95%之间，接种的罗布麻栅锈菌叶片开始大量产生夏孢子，当叶片被孢子对覆盖面积超过50%以上时，扩繁完成。