[发明专利]一种嵌段聚合物固定化酶的制备方法

摘要

本发明涉及了一种嵌段聚合物固定化酶的方法。将聚甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸乙酯嵌段聚合物溶于一定质量配比的N,N-二甲基甲酰胺和四氢呋喃中，通过静电纺丝法制成聚甲基丙烯酸甲酯-丙烯酸乙酯纳米纤维膜，并以其作为酶的固定化载体，通过聚乙二胺氨化和戊二醛活化的方法将酶固定到纳米纤维膜上。本发明利用纳米纤维膜的高比表面积、高空隙率，可以得到具有载酶量高、催化效率高的纳米纤维膜固定化酶。该固定化酶具有易于从反应体系中回收、可反复多次使用、能提高酶的利用率和降低生产成本以及制备过程简单等优点。

主权项

一种嵌段聚合物固定化酶的制备方法，其特征在于具体步骤如下：(1)制备聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜将聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯嵌段聚合物溶于N,N‑二甲基甲酰胺和四氢呋喃组成的溶液中，配成重量百分比为5%~15%的溶液，充分溶解后，注入到静电纺丝装置中，在电压为15~25千伏，喷丝头溶液流量为0.5~1.5毫升/小时、接收距离为10~20厘米的条件下进行电纺丝，获得纤维直径为100~500nm的甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜，将纳米纤维膜在真空干燥箱中在30℃~50℃的条件下干燥5小时~10小时，即得聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜；其中：N,N‑二甲基甲酰胺和四氢呋喃的质量比为1:1~1:4；(2)将步骤(1)所得的聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜浸入 1%~10%的聚乙二胺水溶液中，密封后于70℃的恒温条件下震荡1~3小时，震荡速度为30~120转/分钟；取出处理后的聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜并用pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液充分冲洗，以除去膜上残余的聚乙二胺；将胺化之后的聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜浸入1%~5%的戊二醛水溶液中，密封后于25℃恒温条件下震荡1~2小时，震荡速度为30~120转/分钟；(3)将步骤(2)所得聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜用pH为7.0的磷酸盐缓冲溶液充分冲洗，以除去膜上残余戊二醛；将经过戊二醛活化的纳米纤维复合膜浸没于浓度为0.1~2毫克/毫升的酶磷酸盐缓冲溶液中，密封后于4℃的恒温条件下震荡1~5小时，震荡速度为30~120转/分钟；从溶液中取出纳米纤维膜，用去离子水反复冲洗3~5次，即可得到聚甲基丙烯酸甲酯‑丙烯酸乙酯纳米纤维膜固定化酶；将固定化酶的纳米纤维膜浸入pH为7.0的磷酸缓冲溶液中，于4℃下储存备用。