[发明专利]一种粉状食品中小分子有毒有害物质的通用快速检测方法

摘要

本发明公开了粉状食品中小分子有毒有害物质的通用快速检测方法，特点是具体包括以下步骤：将液体牛奶样品进行简便通用的提取和净化，得到上样液的步骤；配置混合标准溶液和制作基质添加标准曲线的步骤，然后通过超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱联用测定液态奶中小分子有毒有害物质，最后进行浓度计算，优点是前处理和仪器分析过程针对不同理化性质的化合物兼容性强，检测效率高，可操作性强，检测限能满足所有受试的目标物并且降低了检测成本。

主权项

一种粉状食品中小分子有毒有害物质的通用快速检测方法，其特征在于具体包括以下步骤：（1）样品提取将5.00g奶粉或米粉加入塑料离心管中，并在试管中加入400mg固体EDTA‑Na保护剂、25mL提取液乙腈，20000rmp匀浆1min，然后4500rmp离心5min，得到第一上清液；将离心所得的固体残渣加入到12mL的60%乙醇水溶液中充分混匀后，加入15mL乙腈重复提取1次，然后4500rmp离心5min得到第二上清液，将第一上清液和第二上清液合并用乙腈定容至50mL刻度线得到样品提取液；（2）净化方法a．高浓度有机溶剂沉淀碳水化合物将样品提取液置于离心管中，于4500rmp离心15min，沉淀碳水化合物；b．超低温冷冻净化将离心管置于金属试管套中放入‑40℃冰箱中2h，然后4500rmp离心5min后，立即取40mL，上清液快速过滤至鸡心瓶中，并在鸡心瓶中加入30mL异丙醇，40℃蒸至近干；c．固相分散萃取净化在鸡心瓶加入5mL由乙腈、乙醇和水混合成的混合提取液和2.5mL正己烷，然后将鸡心瓶中的液体转移至离心管中，40℃氮吹蒸发除去正己烷后，加入150mg氨基填料和75mg N‑丙基乙二胺填料于离心管中，充分混匀后，于13000rmp离心5min后，取4mL上清液至另一离心管中，40℃氮吹蒸发吹至0.8‑1mL，然后加入0.6mL的二甲亚砜，充分混匀后，用水定容至1.5mL，用采集方法LC Run1模式和LC Run2模式进行测定；（3）混合标准溶液组成和基质标准曲线制备A．混合标准溶液组成：混合标准工作溶液浓度见表1、表2；B．基质标准曲线定量：在5g样品中加入0μL、50μL、100μL、200μL、400μL、800μL上述标准溶液，按照上述（1）‑（2）前处理步骤进行处理；（4）超高效液相色谱‑三重四极杆串联质谱联用测定A．高效液相分离液相条件为：a）色谱柱：Acquity Waters HSS‑T3，2.1mm×100mm，1.8μm；b）如果质谱采用Run1正离子模式进行测定，那么采用流动相A1：0.1%甲酸水溶液，流动相B1：含0.1%甲酸的甲醇；梯度洗脱程序（以体积百分比计）为：0‑7min，100%A1；7‑10.5min，0%A1；10.5‑12min，100%A1；各洗脱时间段中均以流动相B1补足余下的百分数；如果质谱采用Run2在正负离子切换模式进行测定，那么采用流动相A2：2mmol/L乙酸铵水溶液，流动相B2：甲醇；梯度洗脱程序（以体积百分比计）为：0‑7min，100%A2；7‑10.5min，0%A2；10.5‑12min，100%A2；各洗脱时间段中均以流动相B2补足余下的百分数；c）流速：0.4mL/min；d）色谱柱温度：45℃；e）进样量：10μL；f）流路切换：0～1.5min切换阀打开，色谱柱流出液进入废液，1.5min后开始质谱采集，待目标分析物全部洗脱后，流量切换至废液；B.质谱检测质谱条件为：a）采用电喷雾离子化电离源，毛细管电压：正离子、负离子电压分别为3.5kV和3.0kV；b)去溶剂气温度：500℃，离子源温度：150℃；c)去溶剂流速：900L/h，锥孔流速：50L/h；d)碰撞气体：氩气3.3×10‑3毫巴；e)分组方案：粉状食品中小分子有毒有害物质按表1和2所示方式进行检测；表1.LC Run1模式表2.LC Run2模式（4）浓度计算方法样品中待测物的含量根据如下计算公式（1）得到： X = C × V × 1000 m × 1000 · · · ( 1 ) 式中：X－试样中待测物含量，单位为微克每升（μg/L）；C－试样处理液中待测物浓度，根据基质标准曲线计算得到，单位为纳克每毫升（ng/mL）；V—定容体积，单位为毫升（mL）；m－试样体积，单位为毫升（mL）。